Белок CHD1 является АТФ-зависимым хроматин-ремодулирующим фактором, играет ключевую роль в сборке нуклеосом, содержащих вариантный гистон H.3.3. При исследовании морфологии политенных хромосом обнаружено изменение структуры Х-хромосомы у нуль-мутантных по гену Chd1 самцов и статистически достоверное усиление данного эффекта у особей, мутантных по гену Chd1 и по одному из двух генов, кодирующих вариантный гистон H3.3. Необходимость прямого привлечения CHD1 к Х-хромосоме самцов для поддержания её нормальной структуры подтверждена с помощью подхода, основанного на гиперэкспрессии неактивного белка на фоне делеции гена Chd1. С использованием метода ПЦР в реальном времени определена средняя степень политенизации ряда гетерохроматиновых генов. Показано, что увеличение размера хромоцентра политенных хромосом при гиперэкспрессии нативного белка CHD1 не связано с увеличением репликации исследованных гетерохроматиновых генов.

ATP-dependent chromatin remodeling enzymes play key role in nucleosome assembly and incorporation of variant histones into chromatin. CHD1 is the specific factor in the assembly of nucleosomes that contain variant histone H3.3. We have found that mutations in Drosophila Chd1 gene induce decondensation of male X chromosome. An effect of Chd1 null mutation can be increased by deficiency of one of the genes, encoding variant histone H3.3. Thus, the role of CHD1 in the control of male X chromosome organization can be mediated by CHD1 activity in H3.3 histone deposition and exchange. Using real-time PCR we have determined an average number of order polytenization of heterochromatic genes in polytene chromosomes in studied Drosophila lines. We have concluded that the increased size of chromocenter in polytene chromosomes of fruit flies with overexpression of native form of CHD1 isn't associated with increasing the replication level of the studied heterochromatic genes.

• Введение
• 1. Литературный обзор
  • 1.1. Структура и сборка хроматина у высших организмов
    • 1.1.1. “Гистоновый код”
    • 1.1.2. Вариантные гистоны
    • 1.1.3. Сборка хроматина
  • 1.2. CHD1
    • 1.2.1. Структура CHD1
    • 1.2.2. Участие CHD1 в процессе транскрипции
    • 1.2.3. Участие CHD1 в сборке хроматина in vitro
    • 1.2.4. Участие CHD1 в сборке хроматина in vivo
    • 1.2.5. Белок CHD в медицине.
  • 1.3. Дозовая компенсация
  • 1.4 Модели исследований
    • 1.4.1 Политенные хромосомы
  • 1.5. Доминант-негативная форма CHD1
• 2. Материалы и методы
  • 2.1. Линии Drosophila Melanogaster, использованные в эксперименте.
  • 2.2. Генотипы особей в скрещиваниях линий Drosophila Melanogaster.
  • 2.3. Последовательности праймеров для ПЦР в реальном времени
  • 2.4. Методы, используемые для анализа структуры политенных хромосом.
    • 2.4.1. Выделение слюнных желез личинок третьего возраста
    • 2.4.2. Иммуноокрашивание политенных хромосом
    • 2.4.3. Получение фотографий политенных хромосом
    • 2.4.4. Анализ степени изменения структуры X-хромосомы.
  • 2.5. Определение степени политенизации ДНК слюнных желез личинок III возраста D. melanogaster методом ПЦР в реальном времени.
    • 2.5.1. ПЦР в реальном времени.
    • 2.5.2. Выделение геномной ДНК для Real‐Time PCR
    • 2.5.3. Измерение концентрации стандартного образца.
    • 2.5.4. Разведение ДНК.
    • 2.5.5. Проведение ПЦР
    • 2.5.6. Расчет ССП и статистическая обработка полученных данных
• 3. Результаты и обсуждение
  • 3.1.Исследование участия белка CHD1 в регуляции структуры Х-хромосомы самцов дрозофилы
  • 3.2. Анализ влияния повышенной экспрессии белка CHD1 на структуру гетерохроматина.
• Выводы
• Благодарности
• Список литературы