Целью работы является исследование влияния образования комплекса с природным лигандом 1-октен-3-олом и условий макромолекулярного краудинга на структуру, стабильность и процессы фолдинга рекомбинантного бычьего одорант-связывающего белка (bOBP), а также роли механизма «обмена доменов» в поддержании нативной структуры белка и процессах его фолдинга. Показано, что вставка глицина после аминокислотного остатка 121 приводит к образованию стабильной мономерной мутантной формы. Механизм «обмена доменов» не приводит к существенной стабилизации структуры белка, тогда как введение канонической дисульфидной связи напротив стабилизирует структуру мономерной мутантной формы. Связывание лиганда приводит к существенной стабилизации структуры исследуемых белков. Краудинг агент полиэтиленгликоль приводит к стабилизации bOBP и способствует образованию нативного димерного состояния белка даже в отсутствие денатурирующих условий. Эффект краудинг агента зависит от его молекулярной массы и концентрации.

In this work we investigated the effect of formation of a complex with natural ligand 1-octen-3-ol and molecular crowding milieu on structure, stability and folding of recombinant bovine odorant-binding protein (bOBP). We also investigated a role of «domain swapping» in maintaining of the native protein structure and in its folding processes. It was shown that the insertion of glycine after residue 121 prevents «domain swapping» and generates stable monomeric protein bOBP/Gly121+. «Domain swapping» doesn't contribute much to the conformational stability of a protein. In contrast, introduction of a disulfide bond to the structure of a monomeric protein promotes significant stabilizing effect. Binding of the natural ligand leads to increase of conformational stability of the studied proteins. Crowding agent polyethylene glycol stabilizes bOBP and induces formation of the native dimeric state, even in the absence of denaturant. The effect of crowding agents depends on its molecular mass and concentration.