Table | Card | RUSMARC | |
Allowed Actions: –
Action 'Read' will be available if you login or access site from another network
Action 'Download' will be available if you login or access site from another network
Group: Anonymous Network: Internet |
Annotation
Целью настоящей работы являлось получение в клетках Pichia pastoris рекомбинантных форм глюкоамилазы, обладающих высокой каталитической активностью и повышенной термостабильностью по сравнению с белком дикого типа. В данной работе был проведён случайный мутагенез части гена ГА, кодирующей каталитический домен, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с увеличенной частотой ошибок. Продукты ПЦР были заклонированы в новую эписомную плазмиду pPEH?, сконструированную сотрудниками ОМРБ ПИЯФ, и экспрессированы в клетках GS115 Pichia pastoris. В результате скрининга 3000 дрожжевых клонов было отобрано 5 клонов, которые экспрессировали ГА с повышенной термостабильностью. Данные белки были очищены, после чего были определены их константы инактивации в широком диапазоне температур от 68 до 80оС. Результаты измерений показали, что полученные мутантные формы глюкоамилазы F7, С8, F5m2, E5 и B5m обладали повышенной термостабильностью по сравнению с белком дикого типа. Результаты секвенирования выявили следующие аминокислотные замены в найденных белках: F7 (Leu***Met, His***Tyr), С8 (Val***Asp), F5m2 (Thr***Ala), E5 (Thr***Ala, Ser436Pro) и B5m (Val59Ala, Asn80Ser, Ser394Arg).
Document access rights
Network | User group | Action | ||||
---|---|---|---|---|---|---|
ILC SPbPU Local Network | All | |||||
Internet | Authorized users SPbPU | |||||
Internet | Anonymous |
Usage statistics
Access count: 83
Last 30 days: 0 Detailed usage statistics |