Details

Соболева, Елена Валентиновна. Получение термостабильных форм глюкоамилазы гриба A. awamori X100 методами направленной эволюции [Электронный ресурс]: магистерская диссертация: 03.04.02 / Е. В. Соболева; Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого ; науч. рук. М. А. Суржик, В. Р. Сергеев. — Электрон. текстовые дан. (1 файл : 1,76 Мб). — Санкт-Петербург, 2017. — Загл. с титул. экрана. — Текст публикуется с изъятием в соответствии с распоряжением СПбПУ от 13.07.2016 № 91. — Свободный доступ из сети Интернет (чтение). — Adobe Acrobat Reader 7.0. — <URL:http://elib.spbstu.ru/dl/2/v18-651.pdf>. — <URL:http://doi.org/10.18720/SPBPU/2/v18-651>.

Record create date: 4/27/2018

Subject: Белки; глюкоамилаза; термостабильность; мутагенез

UDC: 575.224.4(043.3)

Collections: Выпускные квалификационные работы; Общая коллекция

Links: DOI

Allowed Actions: Read You need Flash Player to read document

Group: Anonymous

Network: FL SPbPU Local Network

Annotation

Целью настоящей работы являлось получение в клетках Pichia pastoris рекомбинантных форм глюкоамилазы, обладающих высокой каталитической активностью и повышенной термостабильностью по сравнению с белком дикого типа. В данной работе был проведён случайный мутагенез части гена ГА, кодирующей каталитический домен, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с увеличенной частотой ошибок. Продукты ПЦР были заклонированы в новую эписомную плазмиду pPEH?, сконструированную сотрудниками ОМРБ ПИЯФ, и экспрессированы в клетках GS115 Pichia pastoris. В результате скрининга 3000 дрожжевых клонов было отобрано 5 клонов, которые экспрессировали ГА с повышенной термостабильностью. Данные белки были очищены, после чего были определены их константы инактивации в широком диапазоне температур от 68 до 80оС. Результаты измерений показали, что полученные мутантные формы глюкоамилазы F7, С8, F5m2, E5 и B5m обладали повышенной термостабильностью по сравнению с белком дикого типа. Результаты секвенирования выявили следующие аминокислотные замены в найденных белках: F7 (Leu***Met, His***Tyr), С8 (Val***Asp), F5m2 (Thr***Ala), E5 (Thr***Ala, Ser436Pro) и B5m (Val59Ala, Asn80Ser, Ser394Arg).

Document access rights

Network User group Action
-> FL SPbPU Local Network All Read
Internet All Read

Document usage statistics

stat Document access count: 70
Last 30 days: 0
Detailed usage statistics