МикроРНК – класс малых молекул – перспективных биомаркеров, ре-гулирующих экспрессию генов на посттранскрипционном уровне. Многие патологические процессы сопровождаются изменением профиля микроРНК в клетках. В данной работе описаны методы выделения микроРНК из различ-ных биологических образцов. Приведены описания основных методов ОТ-ПЦР анализа, применимых для микроРНК. Эти методы ОТ-ПЦР анализа бы-ли применены на практике, для каждого была определена оптимальная об-ласть применения. Разработан и оптимизирован наиболее приемлемый метод анализа микроРНК в клинических образцах.

MicroRNA is a class of small molecules - promising biomarkers which regu-late gene expression at the posttranscriptional level. Many pathological processes are accompanied by a change in the profile of miRNA in cells. In the given work methods of isolating miRNA from various biological samples are described. The descriptions of the main methods of RT-qPCR analysis applicable for miRNA are given. These methods of RT-qPCR analysis were applied in practice, the scope for each method was specified. The most acceptable method of miRNA analysis in clinical samples was developed and optimized.

• диплом файнал
• РЕФЕРАТ
  • РЕФЕРАТ
  • THE ABSTRACT
• диплом файнал
  • Список использованных сокращений
  • ВВЕДЕНИЕ
  • 1.2. Жидкофазные методы
  • 1.2.1. Специфичное выделение
  • 1.2.2. Одновременное выделение РНК и ДНК
  • 1.3. Твердофазные методы
  • 1.3.1. Магнитная сепарация
  • 1.3.2. Выделение с помощью спин-колонок
  • ГЛАВА 2. ОТ-ПЦР МЕТОДЫ АНАЛИЗА МИКРОРНК
  • 2.1 Основные сведения о ПЦР
  • 2.1.1 Этапы ПЦР
  • 2.1.2. Способы оценки эффективности ПЦР
  • 2.2. Варианты «универсалъной» ОТ, применимые для миркоРНК
  • 2.2.1. Полиаденилирование (синтез поли-А хвоста)
  • 2.2.2. Универсальная элонгация и последующий ОТ-ПЦР анализ
  • 2.3. Варианты «специфичной» ОТ, применимые для миркоРНК
  • 2.3.1. Stem-loop метод ОТ-ПЦР анализа
  • 2.3.2. Two-tail метод ОТ-ПЦР
  • ГЛАВА 3. ПРОВЕДЕНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ ОТ-ПЦР АНАЛИЗА. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
  • 3.1. Методы выделения
  • 3.1.1. Выделение тотальной РНК из культур клеток
  • 3.1.2. Выделение РНК из тонкоигольной аспирационной биопсии (ТАБ)
  • 3.1.3. Выделение РНК из гистологических срезов
  • 3.2. Результаты
  • 3.2.1. Динамический диапазон регистрации синтетической микроРНК-451
  • 3.2.2. Анализ экспрессии различных микроРНК в клеточных линиях
  • 3.2.3. Анализ экспрессии различных микроРНК в клинических образцах
  • ГЛАВА 4. ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДА TWO-TAIL В КЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ 4.1. Выбор потенциально маркерных микроРНК путем широкого скрининга (cancer-related miRNA panel)
  • 4.2. Применение метода two-tail для диагностики клинических образцов
  • ЗАКЛЮЧЕНИЕ
  • Список использованных источников
  • Приложение 1. Последовательности олигонуклеотидов
  • Приложение 2. Значения Сt анализа образцов аденокарциномы и список детектируемых микроРНК
  • Приложение 3. Значения Сt анализа образцов очаговых псевдотуморозных образований и список детектируемых микроРНК