Введение: Для гемофилии типа А самой частой мутацией является инверсия интрона 22 гена F8, доля которой составляет от 40% до 50% среди больных с тяжелой формой течения заболевания (менее 1% активного фактора). Для детекции инверсии интрона 22 применяются методы ПЦР для больших фрагментов или Саузерн-блоттинг, однако данные методы являются дорогостоящими и трудоемкими. В работе Rosetti L.C. с соавторами был предложен новый метод детекции инверсионных мутаций в гене F8 - метод инвертированной ПЦР. Метод: рестрикция геномной ДНК эндонуклеазой рестрикции Ksp22I, далее лигирование фрагментов в кольца лигазой T4 и ПЦР-анализ с использованием трех праймеров. Результаты. Были подготовлены для анализа образцы ДНК, полученные из лейкоцитов периферической крови больных гемофилией А и их родственников. Во всех семьях был проведен поиск инверсий интронов 1 и 22 гена F8. В результате проведенной диагностики была выявлена причина заболевания.

Background: Factor VIII intron 22 inversions cause 40%-50% of severe cases of hemophilia A in all human populations. This work describes a method using inverse-PCR. Methods: I-PCR involved 3 steps: Ksp22I restriction; self-ligation of restriction fragments, providing Ksp22I rings; and standard multiplex-PCR analysis. Results: The cause of the disease was detected in 3 families.