Детальная информация

Название: Создание векторов и сверхэкспрессия белков NUDT12 иNUDT13 в клетках человека и в бактериальных клетках: бакалаврская работа
Авторы: Харченко Владлена Дмитриевна
Организация: Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого. Институт физики, нанотехнологий и телекоммуникаций
Выходные сведения: Санкт-Петербург, 2015
Коллекция: Выпускные квалификационные работы; Общая коллекция
Тип файла: PDF
Язык: Русский
Права доступа: Доступ по паролю из сети Интернет (чтение, печать, копирование)

Разрешенные действия:

Действие 'Прочитать' будет доступно, если вы выполните вход в систему или будете работать с сайтом на компьютере в другой сети Действие 'Загрузить' будет доступно, если вы выполните вход в систему или будете работать с сайтом на компьютере в другой сети

Группа: Анонимные пользователи

Сеть: Интернет

Аннотация

Никотинамид аденин динуклеотид (NAD) - участник важнейших метаболических и сигнальных процессов в клетках человека. NAD является кофактором в окислительно-восстановительных реакциях и выступает в роли субстрата для нескольких семейств регуляторных ферментов. Данные сигнальные процессы принимают участие в регуляции экспрессии генов, прохождения по клеточному циклу, репарации ДНК и апоптоза. Регуляция NAD-зависимых метаболических и сигнальных процессов зависит от способности клетки поддерживать определенный уровень данного динуклеотида. Основным механизмом контроля количества NAD в клетках человека является его биосинтез. В клетках бактерий и простейших эукариот, помимо биосинтеза, описан механизм регуляции уровня NAD путем его расщепления до мононуклеотидов NMN и AMP пирофосфатазами семейства Nudix YjaD и NdxA. Белки NUDT12 и NUDT13 характеризуются наибольшей гомологией к Nudix пирофосфатазам YjaD и NdxA. В данном проекте описываются начальные этапы работы, целью которой является проверка гипотезы о том, что белки NUDT12 и NUDT13 могут регулировать уровень NAD в клетках человека. Нами были созданы векторы для экспрессии His-tag-слитых белков NUDT12 и NUDT13 в бактериальных клетках. Далее была проведена трансформация клеток E. coli (Rosetta) полученными векторами и подобраны условия для эффективной сверхэкспрессии рекомбинантных белков. Уровень экспрессии и размер сверхэкспрессированных белков оценивали при помощи разделения в денатурирующем полиакриламидном геле. Также нами были созданы векторы для экспрессии FLAG-слитых белков NUDT12 и NUDT13 в клетках человека. Белки FLAG-NUDT12 и FLAG-NUDT13 были сверхэкспрессированы в клетках HEK293 после их временной трансфекции соответствующими векторами. После этого мы оценивали уровень экспрессии и размер сверхэкспрессированных белков при помощи метода иммуноблоттинга, с использованием специфических антител к FLAG-пептиду.

Права на использование объекта хранения

Место доступа Группа пользователей Действие
Локальная сеть ИБК СПбПУ Все Прочитать Печать Загрузить
Интернет Авторизованные пользователи Прочитать Печать Загрузить
-> Интернет Анонимные пользователи

Статистика использования

stat Количество обращений: 364
За последние 30 дней: 0
Подробная статистика