Данное учебное пособие содержит информацию о наиболее распространённых методах, используемых в биохимической и биофизической лаборатории при исследовании белковых молекул. Помимо физико-химических основ методов учебное пособие содержит подробные протоколы проведения экспериментов, приготовления буферных растворов и выполнения всех необходимых манипуляций, а также отмечены моменты, на которые следует обратить особое внимание в процессе работы. Рассмотрены такие методы, как электрофоретическое разделение белков, определение концентрации белков, вестерн блоттинг, иммуноферментный анализ, методы специфического выделения антигенов из растворов, также приведены некоторые методики подготовки белков к масс-спектрометрической идентификации. Такое пособие будет полезно не только студентам в рамках теоретического изучения методик работы с белками, но также и молодым научным сотрудникам и аспирантам, непосредственно проводящим эксперименты, для понимания базовых основ используемых методик, что позволяет применять их на практике максимально эффективно.

• ОГЛАВЛЕНИЕ
• ВВЕДЕНИЕ
• РАЗДЕЛ 1. ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ
  • § 1.1 ЭФ в ПААГ в денатурирующих условиях в присутствии додецилсульфата натрия
  • § 1.2 Двумерный ЭФ в ПААГ
  • § 1.3 Нативный синий
  • § 1.4 Трициновый ЭФ в ПААГ
• РАЗДЕЛ 2. ОКРАШИВАНИЕ ГЕЛЕЙ ПОСЛЕ ЭФ В ПААГ
  • §2.1 Окрашивание серебром
  • § 2.2 Окрашивание коллоидным раствором Кумасси G250
  • § 2.3 Окрашивание Кумасси R250 (система «уксус-этанол»)
  • § 2.4 Экспресс-окрашивание Кумасси G250
• РАЗДЕЛ 3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ БЕЛКОВ
  • § 3.1 Метод Лоури в модификации Сандермана и Стромингера
  • § 3.2 Метод Брэдфорда
  • § 3.3 По поглощению на длине волны 280 нм
• РАЗДЕЛ 4. ИММУНОДЕТЕКЦИЯ
  • § 4.1 Вестерн блоттинг
  • §4.3 Дот-блоттинг
  • §4.4 Иммунодетекция антигена на мембране
  • §4.5 Хемилюминесценция (реакция люминол-кумаровая кислота)
  • §4.6 Окрашивание при помощи DAB
  • § 4.7 Иммуноферментный анализ
  • § 4.8 Аффинная хроматография в объёме
  • § 4.9 Иммунопреципитация
• РАЗДЕЛ 5. ПРОБОПОДГОТОВКА К МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ
  • § 5.1 Ферментативный гидролиз в геле трипсином
  • § 5.2 Ферментативный гидролиз в растворе трипсином
  • § 5.3 Обессаливание на ZipTip
  • § 5.4 Приготовление матриц для MALDI масс-спектрометрии
  • § 5.5 Получение изотопно меченых стандартов
• ПРИЛОЖЕНИЯ
  • Приложение А. Лизирование клеток
  • Приложение Б. Физические Свойства Радиоизотопов
  • Приложение В. Физические характеристики нуклеозидтрифосфатов и дезоксинуклеотидтрифосфатов
• СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ