Details

Title: Получение термостабильных форм глюкоамилазы гриба A. awamori X100 методами направленной эволюции: магистерская диссертация: 03.04.02
Creators: Соболева Елена Валентиновна
Scientific adviser: Суржик Марина Аркадьевна; Сергеев Владимир Ремирович
Organization: Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого. Институт физики, нанотехнологий и телекоммуникаций
Imprint: Санкт-Петербург, 2017
Collection: Выпускные квалификационные работы; Общая коллекция
Subjects: Белки; глюкоамилаза; термостабильность; мутагенез
UDC: 575.224.4(043.3)
Document type: Master graduation qualification work
File type: PDF
Language: Russian
Speciality code (FGOS): 03.04.02
Speciality group (FGOS): 030000 - Физика и астрономия
DOI: 10.18720/SPBPU/2/v18-651
Rights: Доступ по паролю из сети Интернет (чтение, печать, копирование)

Allowed Actions:

Action 'Read' will be available if you login or access site from another network Action 'Download' will be available if you login or access site from another network

Group: Anonymous

Network: Internet

Annotation

Целью настоящей работы являлось получение в клетках Pichia pastoris рекомбинантных форм глюкоамилазы, обладающих высокой каталитической активностью и повышенной термостабильностью по сравнению с белком дикого типа. В данной работе был проведён случайный мутагенез части гена ГА, кодирующей каталитический домен, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с увеличенной частотой ошибок. Продукты ПЦР были заклонированы в новую эписомную плазмиду pPEH?, сконструированную сотрудниками ОМРБ ПИЯФ, и экспрессированы в клетках GS115 Pichia pastoris. В результате скрининга 3000 дрожжевых клонов было отобрано 5 клонов, которые экспрессировали ГА с повышенной термостабильностью. Данные белки были очищены, после чего были определены их константы инактивации в широком диапазоне температур от 68 до 80оС. Результаты измерений показали, что полученные мутантные формы глюкоамилазы F7, С8, F5m2, E5 и B5m обладали повышенной термостабильностью по сравнению с белком дикого типа. Результаты секвенирования выявили следующие аминокислотные замены в найденных белках: F7 (Leu***Met, His***Tyr), С8 (Val***Asp), F5m2 (Thr***Ala), E5 (Thr***Ala, Ser436Pro) и B5m (Val59Ala, Asn80Ser, Ser394Arg).

Document access rights

Network User group Action
ILC SPbPU Local Network All Read Print Download
Internet Authorized users Read Print Download
-> Internet Anonymous

Usage statistics

stat Access count: 82
Last 30 days: 0
Detailed usage statistics