Детальная информация

Тема выпускной квалификационной работы: «влияние NK-клеток и их микрочастиц на активацию внутриклеточных сигнальных путей в клетках трофобласта в системе in vitro». Работа проведена на базе лаборатории межклеточных ваимодействий ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта». Работа посвящена исследованию особенностей активации STAT-пути внутриклеточной сигнализации в клетках трофобласта линии JEG-3 в модели их взаимодействия с клетками и микрочастицами линии NK-92. В процессе работы было проведено сокультивирование клеток линии трофобласта JEG-3 с микрочастицами клеток линии NK-92 в течение 24 часов, а также дистантное сокультивирование клеток линий JEG-3 и NK-92 с помощью системы трансвелл, определение общего белка по методу Бредфорда и иммуноблоттинг с определением фосфорилированных и нефосфорилированных форм STAT1, STAT3 и ERK1/2. Анализ активации данных белков предполагал расчёт отношения интенсивности фосфорилированной формы к нефосфорилированной формы белка. В результате показано снижение содержания STAT3 в лизатах клеток линии JEG-3, повышение соотношения pSTAT3 (Ser727)/STAT3 в клетках линии JEG-3 после их взаимодействия с микрочастицами интактных клеток линии NK-92 и активированных IL-1β клеток. Показано отсутствие значимых изменений уровня STAT1 и его фосфорилированных форм в клетках линии JEG-3 после их взаимодействия с микрочастицами клеток линии NK-92, активации ERK1/2 киназы также обнаружено не было. Выявлено снижение количества фосфорилированного по серину STAT3 и соотношения pSTAT3 (Ser727)/STAT3 в клетках линии JEG-3 при дистантном взаимодействии клеток линий JEG-3 и NK-92.

Topic of the thesis: “The impact of NK cells and their microparticles on activation of intracellular signaling pathways in trophoblast in vitro”. The work was carried out at the laboratoriy of intercellular communications of D. Ott Research Institute of Obstetrics, Gynecology and Reproductology. At this work we studied activation features of JAK/STAT intracellular signaling pathway in trophoblast cells after incubation with cells and microparticles of NK-92 line. We cultured trophoblastic JEG-3 cells with microparticles of NK-92 cells (Natural killers) for 24 hours. Also, we cultured JEG-3 and NK-92 cells using a transwell system as a model of a distant co-culturing of cells. We determined a total protein by Bradford method and the Western blot was performed. We defined expression level of phosphorylated and non-phosphorylated forms of STAT1, STAT3 and ERK1 / 2. An analysis of the activation of these proteins suggested the calculation of the ratio of the intensity of the phosphorylated form to the non-phosphorylated form of the protein. A decrease of STAT3 expression after their interaction with microparticles of intact NK cells and activated NK cells by IL-1β is observed in lysates of JEG-3 cell lines. Ratio pSTAT3 (Ser727) / STAT3 increased in JEG-3 after they had been cultured together with microparticles of NK cells. No significant changes in the level of STAT1 and its phosphorylated forms in JEG-3 cells after their interaction with microparticles of NK-92 cells were shown. An activation of ERK1 / 2 kinase was also not detected. A decrease in serine phosphorylated STAT3 and pSTAT3 (Ser727) / STAT3 ratio in JEG-3 cells was observed after distant interaction of JEG-3 and NK-92 cells.