Данная работа посвящена оценке функционала индуцибельных систем клеточной гибели на основе гена дифтерийного токсина, субъединица A. Задачи, которые решались в ходе исследования: 1) Разработать генетические конструкции, экспрессирующие DTA; 2) Провести трансфекции данными конструкциями; 3) Изучить динамику экспрессии маркера трансфекции (GFP) в модельной клеточной линии (HEK293), тем самым оценив функциональность полученных систем клеточной гибели. Работа проведена на базе ЗАО «Биокад», где собиралась значительная часть фактического материала: результаты экспрессии маркера трансфекции (GFP) в модельной клеточной линии (HEK293). Были проведены исследования динамики экспресcии GFP, показывающие наглядно, каким образом те или иные элементы плазмиды влияют на цитотоксическую активность дифтерийного токсина. Анализ проводился с помощью проточного цитофлуориметра. В результате были разработаны генетические конструкции, экспрессирующие DTA, проведена трансфекция и проанализирована динамика экспрессии GFP. На основании проведенных исследований на ЗАО «Биокад», можно сделать вывод, что дифтерийный токсин обладает высокой токсичностью, именно поэтому для применения данной системы индукции требуется более эффективное ингибирование экспрессии DTA.

This work is devoted to evaluating the functionality of inducible cell death systems based on the diphtheria toxin gene, subunit A. The research set the following goals: 1) Develop genetic constructs expressing DTA; 2) Carry out transfection these constructs; 3) To study the dynamics of expression of the transfection marker (GFP) in a model cell line (HEK293), thereby evaluating the functionality of the resulting cell death systems. The work was fulfilled on the premises of «Biocad», which included collection of factual materials, i.e. results of expression of the transfection marker (GFP) in a model cell line (HEK293).Studies have been conducted on the dynamics of GFP expression, which clearly show how certain plasmid elements affect the cytotoxic activity of diphtheria toxin. The analysis was carried out using a flow cytometer. As a result, genetic constructs expressing DTA were developed, transfection was performed, and the dynamics of GFP expression was analyzed. Based on the research conducted at «Biocad», it can be concluded that diphtheria toxin is highly toxic, which is why the use of this induction system requires more effective inhibition of DTA expression.