Детальная информация

Данная работа посвящена созданию генетической конструкции, экспрессирующей синтез IGF-LR3 в клетках млекопитающих. Задачи, которые решались в ходе исследования: 1. Получение плазмиды, экспрессирующей целевой ген. 2. Создание рекомбинантного бактериального штамма для наработки полученной плазмидной конструкции в опытно-промышленном масштабе. 3. Получение модельной клеточной культуры-продуцента рекомбинантного белка IGF-LR3. Работа проведена на базе ФГУП ГНИИ Военной Медицины МО РФ при поддержке фирмы ООО «БИОССЕТ». В ходе экспериментов создана плазмида pcDNA3.1(+)-IGF-LR3, кодирующая целевой ген, а также рекомбинантный штамм Escherichia coli DH5α/pcDNA3.1(+)-IGF-LR3. Проведены эксперименты по выделению плазмиды pcDNA3.1(+)-IGF-LR3 из бактерий. Получена рекомбинантная культура клеток фибробластов, несущая плазмиду pcDNA3.1(+)-IGF-LR3. На культуре клеток фибробластов продемонстрирована экспрессия целевого гена с получением белка IGF-LR3. В результате была разработана технология получения плазмидной конструкция pcDNA3.1(+)-IGF-LR3 в опытно-промышленном масштабе, что может послужить основой для промышленной разработки генотерапевтического препарата.

This work is devoted to the creation of a genetic construct expressing the IGF-LR3 in mammalian cells. Tasks that were solved during this study: 1. Preparation of plasmid expressing the target gene. 2. Creation of recombinant bacterial strains for pilot scale production of target plasmid construction. 3. Preparation of model cell culture which were producing recombinant protein IGF-LR3. This work was carried out on the basis of the FSUE SRI Military Medicine of the Russian Federation Ministry of Defense with the support of the BIOSSET company. During the experiments, the plasmid pcDNA3.1 (+)-IGF-LR3 that encodes the target gene, as well as the recombinant Escherichia coli strain DH5α/pcDNA3.1 (+)-IGF-LR3 was created. The plasmid pcDNA3.1(+)-IGF-LR3 from bacteria was isolated. A recombinant fibroblast cell culture carrying the plasmid was obtained. In a fibroblast cell culture, expression of a target gene to produce IGF-LR3 protein has been demonstrated. As a result, a technology to obtain the plasmid construct pcDNA3.1(+)-IGF-LR3 on a pilot scale was developed, which can serve as the basis for the in-dustrial development of a gene therapy drug.