Детальная информация

Название: Получение рекомбинантной ДНК, кодирующей синтез модифицированного инсулин-подобного фактора роста (IGF-LR3): выпускная квалификационная работа магистра: направление 19.04.01 «Биотехнология» ; образовательная программа 19.04.01_01 «Бионанотехнология»
Авторы: Кивилев Евгений Владимирович
Научный руководитель: Аронова Екатерина Борисовна
Другие авторы: Барсукова Наталья Валерьевна
Организация: Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого. Институт биомедицинских систем и биотехнологий
Выходные сведения: Санкт-Петербург, 2020
Коллекция: Выпускные квалификационные работы; Общая коллекция
Тематика: рекомбинантная ДНК; инсулин-подобный фактор роста 1; IGF LR3; генная терапия; recombinant DNA; insulin-like growth faсtor 1; gene therapy
УДК: 577.21; 602.6
Тип документа: Выпускная квалификационная работа магистра
Тип файла: PDF
Язык: Русский
Код специальности ФГОС: 19.04.01
Группа специальностей ФГОС: 190000 - Промышленная экология и биотехнологии
Ссылки: Отзыв руководителя; Рецензия; Отчет о проверке на объем и корректность внешних заимствований
DOI: 10.18720/SPBPU/3/2020/vr/vr20-3786
Права доступа: Доступ по паролю из сети Интернет (чтение)
Дополнительно: Новинка

Разрешенные действия:

Действие 'Прочитать' будет доступно, если вы выполните вход в систему или будете работать с сайтом на компьютере в другой сети

Группа: Анонимные пользователи

Сеть: Интернет

Аннотация

Данная работа посвящена созданию генетической конструкции, экспрессирующей синтез IGF-LR3 в клетках млекопитающих. Задачи, которые решались в ходе исследования: 1. Получение плазмиды, экспрессирующей целевой ген. 2. Создание рекомбинантного бактериального штамма для наработки полученной плазмидной конструкции в опытно-промышленном масштабе. 3. Получение модельной клеточной культуры-продуцента рекомбинантного белка IGF-LR3. Работа проведена на базе ФГУП ГНИИ Военной Медицины МО РФ при поддержке фирмы ООО «БИОССЕТ». В ходе экспериментов создана плазмида pcDNA3.1(+)-IGF-LR3, кодирующая целевой ген, а также рекомбинантный штамм Escherichia coli DH5α/pcDNA3.1(+)-IGF-LR3. Проведены эксперименты по выделению плазмиды pcDNA3.1(+)-IGF-LR3 из бактерий. Получена рекомбинантная культура клеток фибробластов, несущая плазмиду pcDNA3.1(+)-IGF-LR3. На культуре клеток фибробластов продемонстрирована экспрессия целевого гена с получением белка IGF-LR3. В результате была разработана технология получения плазмидной конструкция pcDNA3.1(+)-IGF-LR3 в опытно-промышленном масштабе, что может послужить основой для промышленной разработки генотерапевтического препарата.

This work is devoted to the creation of a genetic construct expressing the IGF-LR3 in mammalian cells. Tasks that were solved during this study: 1. Preparation of plasmid expressing the target gene. 2. Creation of recombinant bacterial strains for pilot scale production of target plasmid construction. 3. Preparation of model cell culture which were producing recombinant protein IGF-LR3. This work was carried out on the basis of the FSUE SRI Military Medicine of the Russian Federation Ministry of Defense with the support of the BIOSSET company. During the experiments, the plasmid pcDNA3.1 (+)-IGF-LR3 that encodes the target gene, as well as the recombinant Escherichia coli strain DH5α/pcDNA3.1 (+)-IGF-LR3 was created. The plasmid pcDNA3.1(+)-IGF-LR3 from bacteria was isolated. A recombinant fibroblast cell culture carrying the plasmid was obtained. In a fibroblast cell culture, expression of a target gene to produce IGF-LR3 protein has been demonstrated. As a result, a technology to obtain the plasmid construct pcDNA3.1(+)-IGF-LR3 on a pilot scale was developed, which can serve as the basis for the in-dustrial development of a gene therapy drug.

Права на использование объекта хранения

Место доступа Группа пользователей Действие
Локальная сеть ИБК СПбПУ Все Прочитать
Интернет Авторизованные пользователи Прочитать
-> Интернет Анонимные пользователи

Оглавление

  • ВВЕДЕНИЕ
  • 1. АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР
    • 1.1. Характеристика IGF1
    • 1.2. Характеристика IGF-LR3
      • 1.2.1. Перспективы применения IGF-LR3
    • 1.3. Обзор заболеваний, связанных с нарушением роста
    • 1.4. Препараты на основе инсулин-подобного фактора роста 1
    • 1.5. Основные этапы разработки генотерапевтического препарата
      • 1.5.1. Подготовительный этап
      • 1.5.2. Выбор терапевтического гена
      • 1.5.3. Выбор пути введения
      • 1.5.4. Подбор системы доставки гена
      • 1.5.5. Обеспечение клеточной специфичности (клеточный таргетинг)
      • 1.5.6. Экспрессия доставленного гена в клетках млекопитающих и человека
    • 1.6. Системы доставки терапевтического гена
    • 1.7. Классификация невирусных методов доставки
      • 1.7.1 Физические методы доставки
        • 1.7.1.1. Микроинъекция
        • 1.7.1.2. Биобаллистика ДНК
        • 1.7.1.3. Электропорация
        • 1.7.1.4. Сонопорация
        • 1.7.1.5. Фотопорация
        • 1.7.1.6. Магнитофекция
        • 1.7.1.7. Гидропорация
      • 1.7.2 Химические методы доставки
        • 1.7.2.1 Неорганические частицы
        • 1.7.2.2. Синтетические и натуральные биоразлагаемые носители
    • 1.8. Классификация вирусных методов доставки
      • 1.8.1. Аденовирусные векторы
      • 1.8.2. Аденоассоциированные вирусные векторы
      • 1.8.3. Ретровирусные векторы
    • 1.9. Выводы по литературному обзору
  • 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
    • 2.1. Материалы исследования
    • 2.2. Перечень сырья и материалов исследования
    • 2.3. Методы исследования
      • 2.3.1. Твердофазный синтез олигонуклеотидов
      • 2.3.2. Сборочная полимеразно-цепная реакция
      • 2.3.3. Очистка целевого гена колоночным методом
      • 2.3.4. Амплификация целевого гена методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР)
      • 2.3.5. Реакция рестрикции-модификации
      • 2.3.6. Лигирование фрагментов ДНК
      • 2.3.7. Приготовление компетентных бактериальных клеток для трансформации
      • 2.3.8 Трансформация бактериальных клеток методом электропорации
      • 2.3.9. Создание банка клеток бактериального штамма
      • 2.3.10. Микроскопирование бактериальных культур
      • 2.3.11. Культивирование клеток бактериального штамма в биореакторе
      • 2.3.12. Выделение плазмиды щелочным методом
      • 2.3.13. Получение клеточной культуры фибробластов
      • 2.3.14. Приготовление компетентных клеточных культур для трансформации
      • 2.3.15. Трансформация клеточных культур методом электропорации
      • 2.3.16. Создание банка клеточных культур
      • 2.3.17. Микроскопирование клеточных культуры
      • 2.3.18. Горизонтальный электрофорез ДНК в агарозном геле
      • 2.3.19. Вертикальный электрофорез белков в полиакриламидном геле в восстанавливающих условиях
      • 2.3.20. Секвенирование ДНК по методу Сэнгера
  • 3. ОПИСАНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТА
  • 4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
  • ЗАКЛЮЧЕНИЕ
  • СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
  • ПРИЛОЖЕНИЕ А
  • ПРИЛОЖЕНИЕ Б
  • ПРИЛОЖЕНИЕ В

Статистика использования

stat Количество обращений: 0
За последние 30 дней: 0
Подробная статистика