Данная работа посвящена исследованию взаимодействия прионов дрожжей с молекулярными шаперонами. Цель выпускной работы –– разработка метода эффективной идентификации мутаций в шапероне SIS1, влияющих на распространение прионов дрожжей. В результате выполнения работы были решены следующие задачи: 1. Получить необходимые штаммы дрожжей и плазмидные конструкции. 2. Проанализировать влияние сверхэкспрессии HSP104 на поддержание приона [PSI+] в полученных штаммах. 3. Разработать и проверить метод соревновательных культур для идентификации мутаций, влияющих на распространение приона. Работа проведена на базе лаборатории физиологической генетики кафедры генетики и биотехнологии СПбГУ. В результате была проведена серия экспериментов по получению новых штаммов и плазмидных конструкций. Анализ влияния сверхэкспрессии HSP104 на поддержание приона [PSI+] подтвердил полученные ранее результаты. В ходе выпускной квалификационной работы на полученных штаммах и плазмидах отработан метод соревновательных культур.

The given work is devoted to the study of the interaction of yeast prions with molecular chaperones. The aim of the final work is to develop a method for the effective identification of mutations in the SIS1 chaperone that affect the propagation of yeast prions. As a result of the work, the following tasks were solved: 1. Receiving the necessary yeast strains and plasmid constructs. 2. Analysis the effect of overexpression of HSP104 on the maintenance of the prion [PSI+] in the obtained strains. 3. Development and test a competitive culture method for identifying mutations that affect prion propagation. The work was carried out on the basis of the Laboratory of Physiological Genetics of the Department of Genetics and Biotechnology of St. Petersburg State University. As a result, a series of experiments were conducted to obtain new strains and plasmid constructs. Analysis of the effect of HSP104 overexpression on prion maintenance [PSI+] confirmed the previously obtained results. In the course of the final qualification work, the method of competitive cultures was developed on the obtained strains and plasmids.

• СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
• ВВЕДЕНИЕ
• ГЛАВА 1. АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР
  • 1.1. История развития представлений о прионах
  • 1.2. Прионы дрожжей
  • 1.3. Взаимодействия прионов дрожжей и молекулярных шаперонов
• ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
  • 2.1. Штаммы дрожжей и плазмиды
  • 2.2. Среды и условия культивирования
    • 2.2.1. Бактериальные среды
    • 2.2.2. Дрожжевые среды
    • 2.2.3. Условия культивирования
  • 2.3. Молекулярно-биологические методы
    • 2.3.1. Рестрикция
    • 2.3.2. Лигирование
    • 2.3.3. Электрофорез ДНК в агарозном геле
    • 2.3.4. Полимеразная цепная реакция с использованием ДНК бактериальных колоний
  • 2.4. Генетические методы
    • 2.4.1. Дрожжевая трансформация
    • 2.4.2. Бактериальная трансформация
• ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
  • 3.1. Конструирование плазмид и получение штамма дрожжей
    • 3.1.1. Получение плазмидных конструкций
    • 3.1.2. Получение штамма
  • 3.2. Анализ влияния сверхэкспрессии HSP104 на поддержание приона
  • 3.3. Анализ метода соревновательных культур
• ЗАКЛЮЧЕНИЕ
• СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ