Данная работа посвящена исследованию изменений организации актинового цитоскелета в процессе репликативного старения линий мезенхимных стволовых клеток FetMSC и ADH-MSC. Для изучения разных аспектов этого явления в работе использовали следующие методы: культивирование клеток, конфокальная микроскопия, иммунофлуоресцентное окрашивание, анализ структур актинового цитоскелета и клеточной подвижности. Прижизненные наблюдения за подвижностью клеток, распластанных на пластике, в стрессовых условиях (в 1%-ной сыворотке) в течение 24 ч показали, что в процессе репликативного старения средняя скорость клеток FetMSC сначала сильно увеличивается с 9-го по 15-й пассаж, затем значительно падает к 22-му пассажу. Обнаружено, что инкубация клеток FetMSC на 22-м пассаже в течение одного часа с селективным ингибитором ROCK1 (Y-27632) приводит к снижению средней скорости клеток и уменьшению коэффициента локальной связной фрактальной размерности (LCFD) актинового цитоскелета клеток. Методом иммунофлуоресцентного анализа нами была исследована внутриклеточная локализация белка RhoA на разных клеточных линиях МСК. На клетках линии FetMSC колокализация RhoA с ядром имеет тенденцию уменьшаться при культивировании с 7-го по 14-й пассаж. На клетках линии ADH-MSC, полученных от больного взрослого донора, колокализация RhoA с ядром имеет тенденцию увеличиваться при культивировании с 8-го по 17-й пассаж. В результате данной работы нами было выяснено, что репликативное старение клеточной линии FetMSC сопровождается значительными изменениями в характере клеточной подвижности; на поздних стадиях репликативного старения клетки FetMSC становятся более чувствительными к модуляторам актинового цитоскелета; белок RhoA может иметь особую роль в процессах репликативного старения и необходимо его дальнейшее изучение.

The given work is devoted to the study of changes in the organization of the actin cytoskeleton in the process of replicative senescence of the mesenchymal stem cell lines FetMSC and ADH-MSC. To study various aspects of this phenomenon, the following methods were used in the work: cell cultivation, confocal microscopy, immunofluorescence staining, analysis of the structures of the actin cytoskeleton and cell motility. Lifetime observations of the motility of cells spread out on plastic under stress conditions (at 1% serum) for 24 h showed that during replicative senescence, the average movement velocity of FetMSC cells first strongly increases from the 9th to the 15th passage, then drops significantly by the 22nd passage. It was found that 1 hour incubation of FetMSC cells at passage 22 with a selective inhibitor of ROCK1 (Y-27632) leads to a decrease in the average cell velocity and a decrease in the coefficient of the local connected fractal dimension (LCFD) of the actin cytoskeleton. We investigated the intracellular localization of the RhoA protein on different MSC cell lines by immunofluorescence analysis. In FetMSC cells, colocalization of RhoA with the nucleus tends to decrease during cultivation from 7th to 14th passage. In ADH-MSC cells obtained from a diseased adult donor, colocalization of RhoA with the nucleus tends to increase during cultivation from 8th to 17th passage. As a result of this work, we found out that the replicative senescence of the FetMSC cell line is accompanied by significant alterations in the pattern of cell motility; at the later stages of replicative senescence, FetMSC cells become more sensitive to actin cytoskeleton modulators; the RhoA protein may have a special role in the processes of replicative aging and its further study is needed.

• СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
• ВВЕДЕНИЕ
• ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
  • 1.1. Мезенхимные стволовые клетки в регенеративной медицине
  • 1.2. Репликативное старение
  • 1.3. Актиновый цитоскелет
  • 1.4. Белки-компоненты актинового цитоскелета
  • 1.5. Белки-регуляторы актинового цитоскелета
  • 1.6. Актиновый цитоскелет в ядре
  • 1.7. Роль актинового цитоскелета в репликативном старении
  • 1.8. Цель работы и задачи
• ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
• ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
• ЗАКЛЮЧЕНИЕ
  • 1. Выводы
  • 2. Обсуждение
• СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ