В данной работе поставили цель отработать протокол для встраивания генетической конструкции в ген Oct4, проверить адекватность её функционирования посредством флуоресценции, элиминации при помощи ганцикловира и генотипирования отобранных клонов, также оптимизировать полученную конструкцию для её встраивания в конец кодирующей области гена Oct4, используя систему CRISPR/Cas9. В итоге были отобраны и проанализированы клоны эмбриональных стволовых клеток, несущие в себе оптимизированную конструкцию, а также раковые клетки линии Neuro-2a, содержащие её и предположительно экспрессирующие Oct4. Было показано, что конструкция действительно успешно встроилась в клетки и адекватно функционировала. Следовательно, такая конструкция может быть использована при дальнейших исследованиях Oct4.

The goal of the work, was to develop a protocol for embedding a genetic construct in the Oct4 gene, to test the adequacy of its functioning by fluorescence, elimination with ganciclovir, and genotyping of selected clones, and to optimize the resulting construct for its knock-in at the end of the coding region of the Oct4 gene using the CRISPR/Cas9 system. As a result, clones of embryonic stem cells carrying the optimized construct were selected and analyzed, as well as cancer cells of the Neuro-2a line containing it and presumably expressing Oct4. It was shown that the desired sequence successfully integrated into the cells and functioned adequately. Therefore, such a construction can be used in further studies of Oct4.