Гигантский бактериофаг phiKZ имеет уникальный механизм упаковки ДНК в фаговой частице – ДНК накручено на продолговатое образование названное внутренним телом. Плотность упаковки ДНК внутри головы фага превышает плотность упаковки внутри эукариотических клеток. В ходе работы были созданы генетические конструкции, представляющие собой плазмиды, содержащие гены белков внутреннего тела (Gp89 либо Gp162), расположенные рядом с геном флуоресцентного белка mNeonGreen, что делало возможным синтез белка внутреннего тела, слитого с флуоресцентным белком. Плазмидами были трансформированы клетки штамма Рseudomonas aeruginosa PAO1. Клетки с плазмидами были инфицированы фагом phiKZ, после чего была сделана серия снимков на флуоресцентном микроскопе, что позволило определить особенности локализации белков внутреннего тела в ходе инфекции. Также была проведена проверка на наличие протеолиза слитых белков внутреннего тела Gp89 и Gp162 при инфекции PAO1 фагом phiKZ. Для этого клетки штамма Р. aeruginosa PAO1, содержащие целевые плазмиды, были инфицированы фагом phiKZ, после чего был проведен вестерн-блоттинг с использованием анти-тел к флуоресцентному белку mNeonGreen. Результаты вестерн-блоттинга не подтвердили наличие протеолиза белков внутреннего тела Gp89 и Gp162 при инфекции PAO1 фагом phiKZ. Изучение поведения белков внутреннего тела фага при инфекции дает новые сведения об особенностях механизма заражения клеток фагом phiKZ. Данные знания могут позволить расширить потенциальные возможности фаговой терапии.

This work is devoted to the study of the localization of the innner body proteins of the phiKZ bacteriophage during Pseudomonas aeruginosa infection. For the study, plasmids with the inner body proteins genes (Gp89 or Gp162), located next to the gene for the fluorescent protein mNeonGreen were created to synthesize the innner body proteins fused with the fluorescent protein. Cells of the P. aeruginosa strain PAO1were transformed with the resulted plasmids. Cells with the plasmids were infected with the phiKZ phage, after which a series of images were taken under a fluorescence microscope to determine the peculiarities of the localization of proteins of the inner body during the infection. It was also tested for the presence of proteolysis of the fusion proteins Gp89 and Gp162 during PAO1 infection with the phiKZ phage. For this, cells of the Pseudomonas aeruginosa PAO1 strain containing the target plasmids were infected with the phiKZ phage, after which western-blotting was performed using antibodies to the mNeonGreen fluorescent protein. Western-blotting results did not confirm the presence of proteolysis of the inner body proteins Gp89 and Gp162 during PAO1 infection with the phiKZ phage. The our study results provide new information about the characteristic of the infection mechanism of the phiKZ phage; this knowledge can expand the potential of phage therapy.