Детальная информация

Тема выпускной квалификационной работы: «Исследование секретома мезенхимных стволовых клеток человека в процессе дифференцировки» Данная работа посвящена исследованию изменений в составе секретома мезенхимных стволовых клеток (МСК) человека в процессе дифференцировки в остеогенном направлении. Для достижения цели ВКР были использованы различные методы клеточной и молекулярной биологии, изучены актуальные публикации в данной области и на их основе разработан протокол сбора секретома с разделением фракций на растворимую и везикулярную. Для подтверждения дифференцировки клеток проводили их окраску на щелочную фосфатазу (ЩФ) и по ван Коса с последующей визуализацией при помощи световой микроскопии. Для протеомного анализа были использованы методы двумерного дифференциального электрофореза и, хромато-масс-спектрометрический анализ. Проведен анализ полученных данных с использованием широкого набора программных инструментов. Результатом ВКР стало выявление и идентификация дифференциальных белков между контрольными и дифференцированными образцами и их функциональная аннотация, позволяющая дать оценку процессам, которые протекают в клетках в процессе дифференцировки. Областью применения результатов является фундаментальная наука в области знаний о механизмах дифференцировки стволовых клеток и регенеративная медицина (с использованием секретома МСК).

The subject of the graduate qualification work is «Investigation of the secretome of human mesenchymal stem cells in the process of differentiation». The given work is devoted to the investigation of changes in the composition of the human mesenchymal stem cells (MSCs) secretome. These changes are confirmed by detecting defferential protein expression in the cells’ proteome at the stages of differentiation. To achieve the goal of investigation, methods of cultivating MSCs were used, the newest works in the field were studies and based on this a protocol for the collection of secretome with separation of fractions into soluble and vesicular was developed. To confirm the differentiation dyeing methods such as alkaline phosphatase and von Kossa were used with later visualization on the light microscope. For proteomic analysis, two-dimensional differential electrophoresis and liquid chromatography mass spectrometric (LC-MS) analysis were used. The result was the identification of differential proteins expressions between the control and differentiated cells and proteins’ functional annotation, which makes it possible to define the processes that are more active in cells during the differentiation process. Analysis of the results made it possible to better understand the staging of this process and to determine its molecular markers. The application area of the results is fundamental science and regenerative medicine with using MSCs secretome.