Данная научно-исследовательская работа посвящена исследованию генов антибиотикорезистентности у Klebsiella pneumoniae и созданию серии тест-систем на основе метода Real-Time ПЦР в мультиплексной формате для детекции этих эпидемиологически актуальных генов лекарственной устойчивости в условиях медицинской организации и при проведении мониторинга антропогенных загрязнений в природных экосистемах.Задачи, которые решались в ходе проведения исследования: 1) Отработка методики идентификации генов резистентности с использованием ПЦР с электрофорезным форматом детекции; 2) Формирование коллекции контрольных образцов бактериальной ДНК, содержащей гены устойчивости к антибиотикам; 3) Идентификация консервативных участков генов и разработка дизайна праймеров для мультиплексной Real-Time ПЦР, позволяющий осуществлять детекцию последовательностей данных генов; 4) Апробация мультиплексной Real-Time ПЦР на коллекции ДНК клинических мультиантибиотикорезистентных штаммов Klebsiella pneumoniae. Объект исследования – в качестве модельного организма для отработки тест-панели были использованы штаммы K. pneumoniae, на которых проводилась апробация мультиплексной Real-Time ПЦР на наличие актуальных генов лекарственной устойчивости. Лабораторные исследования проводились в микробиологической и молекулярно-генетической лаборатории кафедры эпидемиологии, паразитологии и дезинфектологии СЗГМУ им. И. И. Мечникова. В результате исследования были обнаружены гены антибиотикорезистентности во всех исследуемых образцах, предложен дизайн праймеров для консервативных участков генов и проведена мультиплексная Real-Time полимеразная цепная реакция на коллекции ДНК клинических мультиантибиотикорезистентных штаммов Klebsiella pneumoniae.

This research work is devoted to the study of antibiotic resistance genes in Klebsiella pneumoniae and the creation of a series of test systems based on the Real-Time PCR method in a multiplex format for the detection of these epidemiologically relevant drug resistance genes in a medical organization and when monitoring anthropogenic pollution in ecosystems.Tasks that were solved during the study: 1) Development of a methodology for identifying resistance genes using PCR with an electrophoretic detection format; 2) Formation of a collection of control samples of bacterial DNA containing genes for resistance to antibiotics; 3) Identification of conservative regions of genes and development of primer design for multiplex Real-Time PCR, which allows detection of these gene sequences; 4) Approbation of multiplex Real-Time PCR on the DNA collection of clinical multi-antibiotic resistant strains of Klebsiella pneumoniae. The object of the study. K. pneumoniae strains were used as a model organism for testing the test panel, on which multiplex Real-Time PCR was tested for the presence of relevant drug resistance genes. Laboratory studies were carried out in the microbiological and molecular genetic laboratory of the Department of Epidemiology, Parasitology and Disinfectology of the North-Western State Medical University. I. I. Mechnikov. As a result of the study, antibiotic resistance genes were found in all studied samples, a primer design for conservative gene regions was proposed, and a multiplex Real-Time polymerase chain reaction was carried out on DNA collections of clinical multi-antibiotic-resistant strains of Klebsiella pneumoniae.