На 74 с., 26 рисунков, 33 таблицы, 12 приложений.Цель работы – оценка эффективности работы ПЦР-набора «Интифика ВГВ» (производитель: ГК “Алкор Био”, Россия) для определения вируса гепатита В при использовании сырья различных производителей.Задачи:1. Изучение литературы по теме работы;2. Подбор состава смеси для постановки ПЦР-РВ.Проверка эффективно­сти работы системы. Провести замену компонентов ПЦР-смеси: ПЦР-буфер, магний, dNTP’s (дезоксинуклеотидтрифостфаты), праймеры (с разными зондами), полимеразы;3. Модификация ПЦР-смеси путем добавления фермента УДГ (урацилдегидрогеназы);4. Апробация наборов на амплификаторе Light Cycler;5. Анализ полученных результатов.В качестве основного метода диагностики была выбрана ПЦР в реальном времени.  Обнаружение ДНК вируса гепатита В позволяет своевременно диагностировать заболевание и предотвратить возможные последствия. Целью работы являлся подбор компонентов ПЦР-смеси, что актуально при решении вопроса импортозамещения.

74 pages, 26 figures, 33 tables, 12 appendices.The purpose of the work is to evaluate the effectiveness of the PCR kit "Intifica HBV" (manufacturer: GC "Alcor Bio", Russia) for the detection of hepatitis B virus using raw materials from different manufacturers.Tasks:1. Study of literature on the topic of work;2. Selection of the composition of the mixture for setting PCR-RT, checking the efficiency of the system. Change the components of the PCR mixture: PCR buffer, magnesium, dNTP's (deoxynucleotide triphosphates), primers (with different probes), polymerases;3. Modification of the PCR mixture by adding the enzyme UDH (uracil dehydrogenase);4. Approbation of the kits on the Light Cycler;5. Analysis of the results.Real-time PCR was chosen as the main diagnostic method. Detection of hepatitis B virus DNA allows timely diagnosis of the disease and prevention of possible consequences. The aim of the work was to select the components of the PCR mixture, which is relevant when solving the issue of import substitution.

• ВВЕДЕНИЕ
• 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
  • 1.1. Краткая характеристика гепатита B
  • 1.2. Строение вируса гепатита B
  • 1.3. Профилактика гепатита В
  • 1.5. Полимеразная цепная реакция
  • 1.6. История открытия полимеразной цепной реакции
  • 1.7. Суть метода полимеразной цепной реакции
  • 1.8. Преимущества метода ПЦР
  • 1.9. ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ) или количественная ПЦР
• 1.10. Отличие метода ПЦР от ПЦР в режиме реального времени
  • 1.11. ПЦР диагностика гепатита В
• 1.12. Набор «Интифика ВГВ» и принцип его действия
• 4. ОБЕСПЕЧЕНИЕ БЕЗОПАСНОСТИ УСЛОВИЙ ТРУДА
• 4.1. Оценка и анализ опасных и вредных производственных факторов
• ЗАКЛЮЧЕНИЕ
  • СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
• ПРИЛОЖЕНИЯ
• ПРИЛОЖЕНИЕ А. Результаты статистической обработки полученных значений постановки ПЦР. Постановка 1. Проверка ПЦР-буферов
• ПРИЛОЖЕНИЕ Б. Таблица значений выхода по циклам. постановка 1.
• Проверка ПЦР-буферов
• ПРИЛОЖЕНИЕ В. Статистические данные. Постановка 2.
• Проверка разных серий MgCl2 и dNTP.
• ПРИЛОЖЕНИЕ Г. Таблица значений выхода по циклам. Постановка 2. Проверка разных серий MgCl2 и dNTP.
• ПРИЛОЖЕНИЕ Д. Статистические данные. Постановка 3.
• Проверка разных олигонуклеотидов (праймеров и зондов).
• ПРИЛОЖЕНИЕ Е. Таблица значений выхода по циклам. Постановка 3.
• Проверка разных олигонуклеотидов (праймеров и зондов).
• ПРИЛОЖЕНИЕ Ж. Статистические данные. Постановка 4.
• Проверка разных серий TaqAB и совместимость системы с внутренним
• контрольным образцом
• ПРИЛОЖЕНИЕ З. Таблица значений выхода по циклам. Постановка 4.
• Проверка разных серий TaqAB и совместимость системы с внутренним
• контрольным образцом
• ПРИЛОЖЕНИЕ И. Статистические данные. Постановка 5.
• Проверка возможности замены TaqAB полимеразы на TaqM полимеразу
• ПРИЛОЖЕНИЕ К. Таблица значений выхода по циклам. Постановка 5.
• Проверка возможности замены TaqAB полимеразы на TaqM полимеразу
• ПРИЛОЖЕНИЕ Л. Статистические данные. Постановка 6.
• Проверка работы системы с добавлением УДГ (урацилдегидрогеназы)
• ПРИЛОЖЕНИЕ М. Таблица значений выхода по циклам. Постановка 6.
• Проверка работы системы с добавлением УДГ (урацилдегидрогеназы).