Тема выпускной квалификационной работы: «Лиофилизация и долгосрочное хранение реагентов в микрофлюидных устройствах для проведения анализов методом ПЦР в реальном времени». Данная работа посвящена определению возможности хранения в течение шести месяцев лиофилизированной смеси реагентов для проведения полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) внутри камер микрофлюидного устройства (МФУ) без потери активности. Предметом исследования является показатель активности полимеразы, как наименее стабильного компонента смеси: пороговый цикл.Для достижения цели были сформулированы следующие задачи: Разработать протокол и лиофилизировать в камерах микрофлюидного устройства аликвоты жидкой реакционной смеси. Провести серию анализов методом ПЦР-РВ, определить значения порогового цикла. Провести статистическую обработку результатов: сравнить выборки показателей активности полимеразы в контрольной и экспериментальной группах (отличающихся сроком хранения).Лиофилизация была проведена в лаборатории Нанобиотехнологий СПбАУ РАН им. Ж. И. Алферова, анализ методом ПЦР-РВ в лаборатория Информационно-измерительных био- и хемосенсорных микросистем ИАП РАН, там же были изготовлены МФУ. Для проведения ПЦР-РВ был использован готовый набор реагентов «Растение универсал» (ООО «Синтол»), в качестве образца ДНК был использован положительный контроль, включенный в набор. В результате была показана возможность хранения лиофилизированных реагентов в течение шести месяцев при температуре +4 °C без ухудшения свойств, что будет использовано для создания МФУ, автоматизирующих анализ методом ПЦР-РВ.

The subject of the graduate qualification work is “Freeze drying and long-term storage of the reagents for real-time PCR analysis in microfluidic devices”. The given work is devoted to determine the six-month-long storage possibility of freeze-dried reagents mix used in real-time (quantitative) polymerase chain reaction (qPCR) inside of microfluidic device (chip) chambers. Parameters observed during the research were the polymerase activity indicators: threshold cycle – because the enzyme is the least stable component. To reach the goal, the following steps are requiredDevelop a protocol and lyophilize wet reagents mixture inside microfluidic chip chambersPerform a range of qPCR analyses and determine threshold cycle.Perform statistical analysis: compere samples of polymerase activity indicators belonging to control and experimental groups (differ in the storage time). Freeze-drying was performed in the Laboratory of Nanobiotechnologies (Alferov University), qPCR was executed in the Laboratory of information and measurement bio- and chemosensor microsystems (IAI RAS), where the microchips were also made. The premixed reagents kit «GM-101» (SYNTOL, Russia) was used in the study, an included positive control was used as the DNA sample.As a result, it was shown that it is possible to store the reagents for six months at a temperature of +4 °C without decreasing their efficiency, that would be used for developing of qPCR preforming automatized microfluidic devices.