Details

Данная работа посвящена экспрессии и очистке рекомбинантного ДНК-связывающего белка DprA из различных микроорганизмов. Задачи, решаемые в ходе исследования: 1. Оптимизировать условия экспрессии гена белка DprA из организма Escherichia coli слитого с последовательностью, кодирующей 6 последовательных гистидинов, в клетках BL21(DE3). 2. Отработка схемы выделения белка 6xHis-DprA (E. c.) методами хроматографии. 3. Отработка условий экспрессии гена белка DprA из организма Bacillus subtilis слитого с последовательностью, кодирующей 6 последовательных гистидинов, в клетках BL21(DE3)pLysE. 4. Отработка схемы выделения белка 6xHis-DprA (B. s.) методами хроматографии. Объект исследования – рекомбинантный белок DprA. Работа выполнена на базе лаборатории научно-исследовательского комплекса «Нанобиотехнологии» (НИК «НаноБио») в составе Санкт-Петербургского государственного политехнического университета Петра Великого. В работе были использованы базовые микробиологические методы, методы молекулярной биологии, хроматографические методы выделения рекомбинантных белков, а также различные методы контроля и анализа. В ходе выполнения ВКР была достигнута основная цель работы: был получен очищенный препарат рекомбинантного белка DprA.

The given work is devoted to the expression and purification of recombinant DNA-binding protein DprA from various strains of microorganisms. The tasks of the study: 1. To optimize the conditions of expression of the DprA protein gene from Escherichia coli fused with a sequence encoding 6 consecutive histidines in BL21(DE3) cells. 2. Working out of the 6his-DprA (E. c.) protein isolation scheme by chromatography methods. 3. Working out the conditions for the expression of the DprA protein gene from the Bacillus subtilis organism fused with a sequence encoding 6 consecutive genes in BL21(DE3)pLysE cells. 4. Working out of the 6his-DprA (B. s.) protein isolation scheme by chromatography methods. The object of the study is the recombinant protein DprA. The work was carried out on the basis of the laboratory of the research complex "Nanobiotechnology" as part of Peter the Great St. Petersburg Polytechnic University. Basic microbiological methods, methods of molecular biology and chromatographic protein isolation methods, as well as various methods of control and analysis were used in the work. During the research, the main goal of the work was achieved: the protein DprA was purified.