Данная работа посвящена подбору оптимальных условий и системы культивирования вирусов лейкоза птиц RAV-1 и RAV-2 и методам выявления вирусов лейкоза птиц. Методом ИФА был выявлен общий антиген ВЛП p27 в сыворотках кур пород Русская белая и Амрокс с частотой: 0,43 и 0,54 (соответственно). Антиген p27 также был выявлен в полупродуктах гриппозных вакцин. Высокая частота выявления ВЛП подчёркивает важность разработки стандартизованного способа инактивации вирусов гриппа одновременно с контаминантами при производстве гриппозных вакцин. Для экспериментов по контролю инактивации ВЛП стандартными инактивирующими агентами необходимы отработанные методы их культивирования и выявления. В рамках настоящей работы исследовались следующие параметры культивирования RAV-1 и RAV-2: система культивирования, пассаж вируса, длительность культивирования, число замораживаний/оттаиваний. Оптимальными условиями культивирования RAV-1 и RAV-2 являлись использование первичной культуры клеток фибробластов эмбрионов кур (ФЭК) с использованием питательной среды 199, заражение клеток 3-м или 2-м пассажем, культивирование в течение 12 или 7 суток соответственно и двукратное замораживание/оттаивание проб. В ходе отработки метода бляшкообразования для вируса RAV-1 было показано отсутствие цитопатического действия и формирования бляшек. Титр вируса определяли титрованием на ФЭК с последующей постановкой вируссодержащей культуральной жидкости в ИФА. Был получен концентрат RAV-1 с титром не менее 8lg. Результаты настоящей работы позволят проводить накопление ВЛП для дальнейшей отработки способов и условий его инактивации.

The given work is devoted to the selection of optimal conditions and systems of avian leukosis viruses RAV-1 and RAV-2 cultivation and detection methods. By ELISA method, the total ALV p27 antigen was detected in the sera of Russian White and Amrox chicken breeds with frequencies: 0.43 and 0.54 (respectively). The p27 antigen was also detected in the influenza vaccine intermediates. The high frequency of ALV detection emphasizes the importance of developing a standardized method of inactivation of influenza viruses simultaneously with contaminants during production of influenza vaccines. Experiments to control ALV inactivation with standard inactivating agents require well-established methods for cultivation and detection of ALV. The following cultivation parameters of RAV-1 and RAV-2 were investigated in this work: cultivation system, passage of the virus, duration of cultivation, number of freezing/thawing. Optimal cultivation conditions for RAV-1 and RAV-2 were the use of primary culture of chicken embryo fibroblast (CEF) using nutrient medium 199, infection of cells with the 3rd or the 2nd passages, cultivating for 12 or 7 days, respectively, and freezing/thawing samples for 2 times. The absence of cytopathic effect and plaque formation was demonstrated during the plaque-forming methods for RAV-1 virus. The virus titer was determined by titration in CEF followed by ELISA for p27 detection in viral-containing cultural liquid. A RAV-1 concentrate with a titer of at least 8lg was obtained. The results of this work will allow to accumulate ALV for further development of methods and conditions of its inactivation.

• ABBREVIATIONS AND ACRONYMS LIST
• INTRODUCTION
• CHAPTER 1. LITERATURE REVIEW
  • 1.1. History of research of avian leukosis viruses
  • 1.2. Classification of ALV
  • 1.3. Virion structure of ALV
  • 1.4. ALV life cycle
  • 1.5. Immune response to ALV
  • 1.6. Various tumor conditions developing after ALV infection
  • 1.7. Cultivation and detection of ALV
• CHAPTER 2. MATERIALS AND METHODS
  • 2.1 Materials
  • 2.2 Obtaining the primary culture chicken embryos fibroblasts (CEF)
  • 2.3 Obtaining a monolayer of MDCK
  • 2.4 Cell Counting in the Goriaev’s Chamber
  • 2.5 Cultivation of RAV-1 avian leukosis virus in CEs
  • 2.6 Cultivation of avian leukosis virus RAV-2 in MDCK cell culture
  • 2.7 Cultivation of avian leukosis viruses RAV-1 and RAV-2 in primary culture of chicken embryo fibroblasts (CEF)
  • 2.8 Determination of RAV-1 and RAV-2 avian leukosis virus titers by the plaque method
  • 2.9 Determination of avian leukosis virus antigen p27 by ELISA
  • 2.10 ALV titration in primary cell culture of chicken embryo fibroblasts (CEF)
  • 2.11 Statistical data processing
• CHAPTER 3. RESULTS AND DISCUSSION
  • 3.1 Analysis of avian leukosis virus presence in CE and blood serum of chickens
  • 3.2 Analysis of avian leukosis virus presence in influenza vaccine intermediates
  • 3.3 Obtaining a cell culture of primary chicken embryo fibroblasts (CEF)
  • 3.4 Obtaining a cell culture monolayer of MDCK
  • 3.5 Cultivation of avian leukosis virus RAV-1
  • 3.6 Cultivation of RAV-2 avian leukosis virus in primary culture of CEF and MDCK cell culture
  • 3.7 Titration of RAV-1 virus in primary cell culture of CEF
• CONCLUSION
• REFERENCES