Работа посвящена разработке метрологического обеспечения измерений числа копий гена HER2, которое может быть обеспечена за счет применения стандартного образца (СО) числа копий последовательности гена HER2. Отношения чисел копий последовательностей генов HER2 и RPPH1, а также HER2 и CEP17 являются диагностическими маркерами агрессивности рака молочной железы, связанного с гиперэкспрессией HER2. Одним из методов, позволяющих измерить число копий гена, является метод полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ), применение которого требует калибратора. Были проведены исследования клеточных линий как возможных источников генетического материала для создания прототипа СО числа копий последовательности гена HER2. После наращивания клеток отобранной линии HeLa S3 была выделена и очищена геномная ДНК. Методом ПЦР-РВ были подобраны оптимальные условия проведения амплификации, с использованием цифровой капельной ПЦР (цкПЦР) прототипу СО была присвоена характеристика отношения числа копий последовательности гена HER2 к числу копий последовательности гена CEP17. Также составлен бюджет неопределенности выбранной модели измерений. Полученные результаты могут быть использованы для метрологического обеспечения диагностики HER2+ формы рака молочной железы с использованием метода ПЦР-РВ. Данный метод, в отличие от распространенных полуколичественных методов, предполагает измерение числа копий последовательности гена HER2. Внедрение разработанного подхода в клиническую практику повысит достоверность диагностики и сделает подбор соответствующего лечения более точным.

The given work is devoted to the development of metrological support for measuring the copy number of the HER2 gene, which can be provided using a standard reference material (SRM) of the number of copies of the HER2 gene sequence. The ratio of the copy number of the HER2 and RPPH1 gene sequences, as well as HER2 and CEP17, are diagnostic markers of the aggressiveness of breast cancer associated with HER2 overexpression. One of the methods to measure the gene copy number is the real-time polymerase chain reaction (PCR-RT) method, which requires a calibrator for using. Studies of cell lines as possible sources of genetic material for the creation of a prototype with the HER2 gene copy number sequence were carried out. After the cells of the selected HeLa S3 line were enlarged, genomic DNA was isolated and purified. Optimal amplification conditions were selected by PCR-RT and using digital droplet PCR (ddPCR) the SRM prototype was assigned a characteristic of the ratio of the copy number of the HER2 gene sequence to the number of copies of the CEP17 gene sequence. The uncertainty budget of the selected measurement model has also been compiled. The obtained results can be used for metrological support of the diagnosis of HER2+ forms of breast cancer using the PCR-RT method. This method, unlike common semi-quantitative methods, involves measuring the number of copies of the HER2 gene sequence. The introduction of the developed approach into clinical practice will increase the reliability of diagnosis and make the selection of appropriate treatment more accurate.