Детальная информация

Цель данной работы – с использованием делеционного анализа выявить участки человеческого белка NUP58, отвечающие за агрегацию. В ходе анализа профиля амилоидогенности белка NUP58, полученного в программе ArchCandy, были выбраны четыре фрагмента для проверки на агрегацию: NUP58-215-end, NUP58-468-end, NUP58-1-95 и NUP58-175-213. Были получены конструкции с делеционными вариантами NUP58, а именно плазмиды для анализа агрегирования в дрожжевой системе и для анализа агрегации в системе С-DAG. Также для двух конструкций NUP58-215-end и NUP58-1-95 были получены следующие результаты проверки амилоидных свойств: было показано, что фрагмент NUP58-1-95 проявляет амилоидные свойства в системе С-DAG; фрагмент NUP58_215-end не проявляет амилоидные свойства в системе С-DAG; показана агрегация для фрагментов NUP58-1-95 и NUP58-215-end в дрожжевой системе на снимках флуоресцентного микроскопа. Дополнительно было показано положительное влияние [PIN+] статуса на агрегацию конструкции Nup58_215-end, (увеличение числа агрегатов) и отрицательное на конструкцию Nup58_1-95, (уменьшение числа агрегатов). Область применения полученных результатов включает развитие фундаментальной науки и терапии нейродегенеративных заболеваний.

The aim of this work is to identify regions of the human NUP58 protein which are responsible for aggregation using deletion analysis. During the analysis of the NUP58 amyloidogenicity profile four fragments were selected for aggregation testing: NUP58-215-end, NUP58-468-end, NUP58-1-95, and NUP58-175-213. Constructions with deletion variants of NUP58 protein were obtained, especially plasmids for the analysis of aggregation in the yeasts and for the analysis of aggregation in the C-DAG system. Also, for the two constructions NUP58-215-end and NUP58-1-95, the following amyloid properties were obtained: the NUP58-1-95 fragment show amyloid properties in the C-DAG system; the NUP58_215-end fragment doesn’t show amyloid properties in the C-DAG system; it was shown aggregation for NUP58-1-95 and NUP58-215-end fragments in the yeasts on fluorescence microscope images. Additionally, it was shown a positive effect of [PIN+] status on the aggregation of the Nup58_215-end, construction (an increase in the number of aggregates) and a negative effect on the Nup58_1-95, construction (a decrease in the number of aggregates). The scope of the obtained results includes the development of fundamental science and therapy for neurodegenerative diseases.