Тема выпускной квалификационной работы: «Лаборатория на мишени для специфичной экстракции аддуктов белков крови с галогеносодержащими ксенобиотиками». Работа посвящена разработке метода определения галогенсодержащих аддуктов белков крови непосредственно на МАЛДИ мишени. Подход «Лаборатория на мишени» ускоряет и упрощает процесс пробоподготовки, что делает его перспективным при решении протеомных и биоорганических задач. Охарактеризован процесс формирования мультимолекулярных структур металл-аффинного сорбента на основе монослоев стеараты лантана и получены сорбенты на основе стеаратов Cu, Ni, Co, Fe, In, Ga, Eu и La, подобраны оптимальные параметры для получения сорбентов и проведения металл-аффинной экстракции на мишени МАЛДИ. Показано, что полученные структуры обладают развитой и доступной для аналита поверхностью, а также проявляют сродство к пептидам, модифицированным хлорсодержащими ксенобиотиками. С использованием метода «Лаборатория на мишени» была проведена металл-аффинная экстракция аддуктов глобина человека с двумя модельными хлорсодержащими алкилирующими агентами: N1-(4-хлорфенил)-2- хлорацетамид (Cl-1) и N1-(2,4-дихлорфенил)-2-хлорацетамид (Cl-2). По результатам масс-спектрометрического анализа был установлен маркерный триптический пептид LLGNVLVCVLAHHFGK бета-субъединицы глобина человека, в структуру которого входит С-112, обладающий чувствительностью к модификации алкилирующими агентами. Подход апробировали на лекарственном препарате Диклофенак, который обладает схожим с модельным агентом Cl-2 структурным звеном. Маркерный пептид, модифицированный продуктами УФ/TiO2-ФКО диклофенака, был надежно идентифицирован после проведения металл-аффинной экстракции непосредственно на мишени МАЛДИ. Разработанная методика «Лаборатории на мишени», отличающаяся чувствительностью, высокой производительностью и экспрессностью, может быть применима для обнаружения активных метаболитов лекарственных средств на этапе доклинических испытаний, а также для ретроспективной диагностики отравлений ксенобиотиками.

Theme of the master's work: «Lab-on-a-plate for the specific extraction of adducts of blood proteins with halogenated xenobiotics». The work is devoted to the development of a method for the determination of halogen-containing adducts of blood proteins directly on a MALDI target. The Lab-on-plate approach speeds up and simplifies the sample preparation process, which makes it promising for solving proteomic and bioorganic problems. The process of formation of multimolecular structures of a metal-affinity sorbent based on lanthanum stearate monolayers is characterized and sorbents based on Cu, Ni, Co, Fe, In, Ga, Eu, and La stearates are obtained, optimal parameters are selected for obtaining sorbents and performing metal-affinity extraction on a target MALDI. It was shown that the resulting structures have a developed surface accessible to the analyte, and also exhibit affinity for chlorinecontaining peptides modified with chlorine-containing xenobiotics. Metal-affinity extraction of human globin adducts with two model chlorinecontaining alkylating agents N1-(4-chlorophenyl)-2-chloroacetamide (Cl-1) and N1-(2,4-dichlorophenyl)-2-chloroacetamide (Cl-2) was carried out using the method "Lab-on-plate". Based on the results of mass spectrometric analysis, a marker tryptic peptide LLGNVLVCVLAHHFGK of the human globin beta subunit was established, the structure of which includes C-112, which is sensitive to modification by alkylating agents. The approach was tested on the drug Diclofenac, which has a structural unit similar to the model agent Cl-2. The marker peptide modified with diclofenac UV/TiO2-PCO products was reliably identified after metal-affinity extraction directly on the MALDI target. The developed method "Lab-on-plate", characterized by sensitivity, high throughput and rapidity, can be used to detect active metabolites of drugs at the stage of preclinical trials, as well as for the retrospective diagnosis of xenobiotic poisoning.