Данная работа посвящена подбору оптимального состава реакционного буфера для проведения рекомбиназно-полимеразной амплификации, а также подбору наиболее подходящего фермента для проведения обратной транскрипции в одной реакции с RPA. Задачи, которые решались в ходе исследования: подбор состава реакционного буфера для рекомбиназно-полимеразной амплификации; оптимизация буферной системы для проведения реакции RPA; подбор типа и концентрации краудинг-агента в реакции RPA; подбор условий, позволяющих одновременно проводить реакцию обратной транскрипции и изотермической амплификации. Объект исследования – система изотермической амплификации RPA, используемая в разрабатываемой универсальной диагностической платформе для выявления патогенов различной природы. Работа выполнена на базе Научно-исследовательского комплекса «Нано-биотехнологии». Обзор литературы включает описание методов изотермической амплификации, а также молекулярные механизмы системы CRISPR-Cas. По результатам исследований были выявлены оптимальные составы бу-ферных систем, подобраны тип и концентрация краудинг-агента, а также фермент РЕВЕРТА-L (АмплиСенс), позволяющий проводить реакцию обратной транскрипции и рекомбиназно-полимеразной амплификации в одной пробирке. Результаты исследований будут применены при разработке универсальной диагностической платформы для обнаружения нуклеиновых кислот с высокой чувствительностью и специфичностью и высокой степенью портативности. При написании литературного обзора использовались следующие базы данных: Scopus, PubMed, eLIBRARY.RU, cyberlenika.ru. Обработка экспериментальных данных была выполнена с помощью про-грамм Origin, ImageJ, ImageLab.

This work is devoted to the selection of the optimal reaction buffer composition for carrying out recombinase-polymerase amplification, as well as the selection of the most suitable enzyme for performing reverse transcription in one reaction with RPA. Problems that were solved during the study: selection of the recombinase-polymerase amplification reaction buffer compo-sition; optimization of the buffer system for the RPA reaction; selection of the type and concentration of crowding agent in the RPA reaction; selection of conditions that allow simultaneous implementation of reverse transcription and isothermal amplification reactions. The object of study is the RPA isothermal amplification system, used in the universal diagnostic platform being developed for identifying pathogens of various natures. The work was carried out based on the Nano-Biotechnologies Research Complex. The literature review includes a description of isothermal amplification methods, as well as the molecular mechanisms of the CRISPR-Cas system. Based on the research results, the optimal compositions of buffer systems were identified, the type and concentration of the crowding agent was selected, as well as the REVERTA-L enzyme (AmpliSens), which allows the reaction of reverse transcription and recombinase-polymerase amplification to be carried out in one test tube. The research results will be used in the development of a universal diagnostic platform for the detection of nucleic acids with high sensitivity and specificity and a high degree of portability. When writing the literature review, the following databases were used: Scopus, PubMed, eLIBRARY.RU, cyberlenika.ru. Processing of experimental data was carried out using Origin, ImageJ, ImageLab programs.