Данная работа посвящена изучению взаимодействия между депо-управляемыми каналами Orai и эндогенными кальций-зависимыми хлорными каналами (СаСС) ANO6 в клетках HEK293. Аноктамин 6 (ANO6/TMEM16F) совмещает в себе функции кальций-зависимого ионного канала и фосфолипидной скрамблазы. Нарушение его работы приводит к развитию множества патологий почти во всех органах человека. Для активации ANO6 требуются высокая внутриклеточная концентрация кальция.  Депо-управляемый вход кальция, опосредованный кальциевыми сенсорами STIM и депо-управляемыми каналами Orai является одним из основных источников кальция в электро-невозбудимых клетках. При помощи метода локальной фиксации потенциала, регистрируя ионные токи через одиночные каналы, а также интегральный ток через плазматическую мембрану в клетках HEK293, мы впервые показали, что эндогенные СаСС в клетках HEK293 сформированы белками ANO6. Нами было показано, что пассивное опустошение кальциевого депо приводит к активации эндогенных каналов ANO6 в клетках HEK293. Активность эндогенных депо-управляемых каналов Orai подавлялась селективным блокатором Synta66 или доминантно-негативным мутантом Orai1 E106Q. Таким образом, наши данные показывают, что вход ионов кальция через канал Orai необходим для активации эндогенных ANO6 в клетках HEK293.

This work is dedicated to the study of calcium activated chloride channels (CaCC) ANO6 and endogenous store-operated Orai channels. Anoctamine 6 (ANO6/TMEM16F) combines the functions of a calcium-activated ion channel and phospholipid scramblase.  Its malfunction leads to the development of many pathologies in almost all human body organs. High intracellular calcium concentrations are required to activate ANO6. Store-operated calcium entry, mediated by STIM calcium sensors and store-operated Orai channels, is one of the main sources of calcium in non-excitable cells. Using patch clamp methods, we have registered currents through single ion channels, as well as a whole cell current across the plasma membrane in HEK293 cells. For the first time we have shown that endogenous CaCC in HEK293 cells are formed by ANO6 proteins. We have shown that passive depletion of the calcium store leads to activation of endogenous ANO6 channels in HEK293 cells. The activity of endogenous store-operated Orai channels was suppressed by the selective Orai inhibitor Synta66 and by the dominant-negative mutant Orai1 E106Q overexpression. Thus, our data show that the entry of calcium ions through the Orai channels is necessary for the activation of endogenous ANO6 channels in HEK293 cells.