Данная работа посвящена оценке влияния ингибирования киназной активности богатой лейциновыми повторами киназы 2 (LRRK2) на лизосомную активность в первичной культуре макрофагов периферической крови (ПКМПК) пациентов со спорадической болезнью Паркинсона (сБП), деменцией с тельцами Леви (ДТЛ) и множественной системной атрофией (МСА). В ходе работы была получена и культивирована ПКМПК пациентов со сБП, ДТЛ, МСА и контроля в присутствии и без селективного ингибитора киназной активности LRRK2 MLi-2, оценено влияние ингибирования киназной активности LRRK2 на активность лизосомного фермента глюкоцереброзидазы (GCase) и субстрата глюкозилсфингозина (HexSph) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией и на относительный уровень белков p62 и LC3-II методом вестерн-блоттинга в ПКМПК пациентов со сБП, ДТЛ, МСА и контроля. Также в работе впервые было показано влияние ингибирования киназной активности LRRK2 на относительный уровень GCase пациентов со сБП. Эффективность ингибирования киназной активности была подтверждена действием MLi-2 на белок pT73-Rab10. В результате работы было показано снижение активности GCase у пациентов с МСА и увеличение концентрации HexSph у пациентов со сБП, ДТЛ и МСА в ПКМПК. Ингибирование киназной активности LRRK2 не влияло на активность GCase и концентрацию HexSph в ПКМПК пациентов с синуклеинопатиями и контроля. Было показано, что пациенты со сБП характеризуются увеличением относительного уровня белка p62. Ингибирование киназной активности LRRK2 приводит к увеличению белка p62 и GCase в ПКМПК пациентов со сБП при отсутствии изменений в уровне LC3-II.

This work is devoted to assessing the effect of inhibition of leucine-rich repeat kinase 2 (LRRK2) kinase activity on lysosomal hydrolase activity and the level of protein markers of autophagy in primary culture of peripheral blood macrophages of patients with sporadic Parkinsons disease (sPD), dementia with Lewy bodies (DLB) and multiple system atrophy (MSA). A primary culture of peripheral blood macrophages of patients with sPD, DLB, MSA and control was obtained and cultivated in the presence and without the selective inhibitor of LRRK2 kinase activity MLi-2. The effect of LRRK2 kinase activity inhibition on the activity of the lysosomal enzyme glucocerebrosidase (GCase) and the substrate glucosylsphingosine (HexSph) was assessed by high-performance liquid chromatography in combination with tandem mass spectrometry and on the relative level of p62 and LC3-II proteins by Western blotting in the primary culture of macrophages of patients with sPD, DLB, MSA and control. Also, for the first time the effect of LRRK2 kinase activity inhibition on the relative level of GCase in patients with sPD was shown. The efficiency of kinase activity inhibition was confirmed by the effect of MLi-2 on the pT73-Rab10 protein. The study showed a decrease in GCase activity in patients with MSA and an increase in HexSph concentration in patients with sPD, DLB and MSA in the primary culture of peripheral blood macrophages. Inhibition of LRRK2 kinase activity did not affect GCase activity and HexSph concentration in the primary culture of peripheral blood macrophages of patients with synucleinopathies and controls. It was shown that patients with sPD are characterized by an increase in the relative level of p62 protein. Inhibition of LRRK2 kinase activity leads to an increase in p62 and GCase protein in the primary culture of peripheral blood macrophages of patients with sPD in the absence of changes in the LC3-II level.