Поиск противовирусных препаратов, активных в отношении различных штаммов вируса гриппа, является чрезвычайно актуальной задачей. В то время как мРНК-вакцины, одобренные к экстренному применению в период COVID-19, продемонстрировали безопасность и высокую эффективность, терапевтический подход, основанный на технологии мРНК, представляет собой многообещающую альтернативную стратегию. Данная работа посвящена in vitro исследованию лечебно-профилактического потенциала мРНК, кодирующих Fab-фрагменты (2/3-Fab) ненейтрализующих антител к внутреннему консервативному белку вируса гриппа B – нуклеопротеину. В ходе изучения основных свойств вируса гриппа B/Austria/1359417/2021 был получен его титр в единицах 50%-ного цитопатического действия с помощью реакции гемагглютинации (РГА) и иммуноферментного анализа (ИФА). Флуоресцентная микроскопия и люциферазный тест подтвердили способность липосом 2X3-DOPE успешно трансфицировать клетки MDCK и доставлять в них модельные мРНК зеленого флуоресцентного белка eGFP и мРНК люциферазы светлячка (FLuc) соответственно. Установлен факт внутриклеточной наработки антител 2/3-Fab и описана динамика их накопления. Охарактеризовано влияние комплексов липосом 2X3-DOPE и мРНК (FLuc) на заражение клеток MDCK вирусом гриппа B/Austria/1359417/2021. Как следствие, оптимизированы условия доставки мРНК-2/3-Fab, при которых транспорт липоплексных структур нейтрален в отношении инфицирования, то есть не носит ни провирусный, ни противовирусный характер. На основании подобранных временных параметров проведен эксперимент по определению противовирусного эффекта от применения терапевтических мРНК-2/3-Fab, подтвердивший существенное подавление вирусной репликации. мРНК-2/3-Fab значительно снижают титр и приводят к показателям, сопоставимым с действием занамивира. Полученные результаты с точки зрения практической пользы могут быть рассмотрены как стартовые при расширении списка исследуемых штаммов вируса гриппа, а также при переходе к системам in vivo с постепенным совершенствованием их моделей и усложнением реакций иммунного ответа.

The search for antiviral drugs that are active against different strains of the influenza virus is an extremely urgent task. While mRNA vaccines approved for emergency use during COVID-19 have demonstrated safety and high efficacy, the therapeutic approach based on mRNA technology represents a promising alternative strategy. The given work is devoted to in vitro study of the preventive and treatment potential of mRNAs encoding Fab-fragments (2/3-Fab) of non-neutralizing antibodies to the internal conserved protein of influenza B virus – nucleoprotein. While studying the main properties of influenza B/Austria/1359417/2021 virus, its titer was obtained in units of 50% cytopathic activity by hemagglutination assay (HA) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Fluorescence microscopy and luciferase assay confirmed the ability of 2X3-DOPE liposomes to successfully transfect MDCK cells and deliver model mRNAs of green fluorescent protein eGFP and firefly luciferase (FLuc) respectively. The intracellular production of 2/3-Fab was established and the dynamics of their accumulation was described. The effect of 2X3-DOPE liposome and mRNA (FLuc) complexes on infection of MDCK cells with influenza B/Austria/1359417/2021 virus was characterized. As a consequence, mRNA-2/3-Fab delivery conditions were optimized under which the transport of lipoplex structures is neutral with respect to infection, i.e. neither pro-viral nor antiviral in nature. Based on the selected time parameters, an experiment was conducted to determine the antiviral effect of therapeutic mRNA-2/3-Fab, which confirmed a significant suppression of viral replication. mRNA-2/3-Fab noticeably reduced the titer and resulted in rates comparable to the effect of zanamivir. Considering practical benefit, the obtained results can be a starting point for expanding the list of influenza virus strains under study, as well as for the transition to in vivo systems with gradual improvement of their models and complication of immune response reactions.