Данная работа посвящена попытке понять причины различий в динамике восстановления количества белка рецептора ЭФР в HeLa и энМСК после предварительной стимуляции деградации рецептора лигандом ЭФР. Объектом исследования является одна опухолевая (патологическая) линия клеток HeLa и одна линия клеток человека, выделенная из десквамированного эндометрия человека. Количество рецепторных белков оценивали методом электрофоретического разделения с последующим иммуноблоттингом. Оценка количества мРНК проводилось ПЦР в реальном времени. Целью работы является сравнить роль лизосомной деградации и синтеза de novo в регуляции количества рецептора ЭФР в энМСК и HeLa. Показали, что энМСК человека экспрессируют белок рецептора ЭФР на уровне не меньше, чем клетки опухолего эпителиального происхождения HeLa, сохраняя при этом свойства нормальных клеток. Полученные результаты являются частью сравнительного анализа ЭФР-рецепторной системы важного как для понимания организации нормальных сигнальных путей, так и для механизмов возникновения патологий. Снижение количества рецептора в условиях подавления трансляции в обеих клеточных линиях схоже и свидетельствует о наличии синтеза de novo в обеих клеточных линиях. Стимуляция деградации рЭФР при действии лиганда в присутствии циклогексимида приводит к практически полному исчезновению рЭФР ко вторым суткам.

This work is devoted to an attempt to understand the reasons for the differences in the dynamics of restoration of the amount of EGF receptor protein in HeLa and enMSCs after preliminary stimulation of receptor degradation by EGF ligand. The object of the study is one tumor (pathological) HeLa cell line and one human cell line isolated from desquamated human endometrium. The amount of receptor proteins was assessed by electrophoretic separation followed by immunoblotting. The amount of mRNA was assessed by real-time PCR. The aim of the work is to compare the role of lysosomal degradation and de novo synthesis in the regulation of the amount of EGF receptor in enMSCs and HeLa. It was shown that human enMSCs express the EGF receptor protein at a level no less than HeLa cells of tumor epithelial origin, while maintaining the properties of normal cells. The results obtained are part of a comparative analysis of the EGF-receptor system, which is important both for understanding the organization of normal signaling pathways and for the mechanisms of the occurrence of pathologies. The decrease in the amount of receptor under conditions of translation suppression in both cell lines is similar and indicates the presence of de novo synthesis in both cell lines. Stimulation of rEGF degradation by the action of a ligand in the presence of cycloheximide leads to the almost complete disappearance of rEGF by the second day.

• ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ
• ВВЕДЕНИЕ
  • Актуальность исследования
  • Цели и задачи исследования
• Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
  • 1.1 Общие представле ния о рецепторе ЭФР
    • 1.1.1 Семейство ErbB и лиганды рецептора ЭФР
    • 1.1.2 Сигнальные каскады, активируемые рецептором ЭФР
      • 1.1.2.1 MAP киназный путь
      • 1.1.2.2 PI3K/Akt путь
      • 1.1.2.3 Фосфолипаза Cγ
  • 1.2 Трансляция и транскрипция гена рецептора ЭФР
    • 1.2.1 Ген рецептора ЭФР
    • 1.2.2 Транскрипция гена и его регуляция
    • 1.2.3 Трансляция и его регуляция
  • 1.3 Эндоцитозный путь рецептора ЭФР
• Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
  • 2.1 Клеточные культуры
  • 2.2 Стимуляция эндоцитоза
  • 2.3 Электрофорез
  • 2.4 Иммуноблоттинг
  • 2.5 Выделение РНК
  • 2.6 Количественная ПЦР с обратной транскрипцией
• Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
• ЗАКЛЮЧЕНИЕ
  • Выводы
• СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ