Проблема онкологических заболеваний - один из главных вызовов науки XXI века. Для поиска эффективного лекарства реализуются исследования по всему миру в различных областях медицины, физики, биохимии. Наиболее эффективным из возможных путей лечения может стать восстановление правильного функционирования репарационных процессов в клетке, которые могут нарушаться в силу различных эндогенных и экзогенных факторов. Одним из важнейших репарационных белков является RAD51, участвующий в восстановлении двухцепочечных разрывов ДНК, и репликативных вилок ДНК, подвергнувшихся коллапсу. Не смотря на его ключевую функцию, белок остается малоизученным, в связи с чем в данной работе было проведено исследование, в ходе которого белок выделяли (проводили трансформацию методом электропорации, экспрессию, наработку, очистку методами аффинной и ионообменной хроматографии, концентрацию) и характеризовали его ДНК-связывающую активность с одноцепочечной и двуцепочечной ДНК при помощи метода оптического захвата на установке «Лазерный пинцет».

The problem of cancer is one of the main challenges for scientists of the XXI century. To find an effective cure, researches are realized all over the world in different fields of medicine, physics, biochemistry. The most effective of possible ways of treatment may be restoration of proper functioning of repair processes in the cell in case of their disorder arising due to various endogenous and exogenous factors. One of the most important repair proteins is RAD51, which is involved in  repairing of double-stranded DNA breaks and replicative DNA forks that have undergone collapse. In spite of its key function, the protein remains poorly studied; therefore, in this work we conducted a study in which we isolated the protein (performed transformation by electroporation, expression, production, purification by affinity and anion-exchange chromatography, concentration) and characterized its DNA-binding activity with single-stranded and double-stranded DNA using the optical trapping method on the installation “Optical Tweezers”.

• ВВЕДЕНИЕ
• 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
  • 1.1 Репарация ДНК
  • 1.2 Гомологичная репарация ДНК
  • 1.3 RAD51 – ключевой фермент рекомбинационной репарации
  • 1.4 Выделение и очистка рекомбинантных белков
• 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
  • 2.1 Трансформация методом теплового шока
  • 2.2 Выделение и наработка плазмидной ДНК
  • 2.3 Электропорация
  • 2.4 Электрофорез в полиакриламидном геле
  • 2.5 Метод оптического захвата
• 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
  • 3.1 Проведение экспресии и наработка белка RAD51
  • 3.2 Очистка рекомбинантного RAD51 из наработанной бактериальной биомассы методами хроматографии
  • 3.3 Проверка ДНК-связывающей активности выделенного RAD51 при помощи метода оптического захвата
• ЗАКЛЮЧЕНИЕ
• ПРИЛОЖЕНИЕ А.
• СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ