Details

Работа посвящена разработке метрологического обеспечения измерений содержания молекулярных маркеров HER2, PIK3CA c.1633G>A и EGFR del19, проводимых в рамках лабораторной ДНК-диагностики онкологических заболеваний. Выделена и очищена геномная ДНК из выбранных по литературным данным клеточных линий. Подобраны оптимальные условия проведения цифровой ПЦР, измерены концентрации копий последовательностей ДНК для выбранных маркеров. В результате работы разработаны прототипы стандартных образцов (СО) состава ДНК человека, аттестованных по содержанию последовательностей генов HER2 (СО ДНК HER2), EGFR (СО ДНК EGFR del19) и PIK3CA (СО ДНК PIK3CA c.1633G>A). Проведено исследование стабильности прототипа СО ДНК PIK3CA c.1633G>A. Также составлен бюджет неопределенности для выбранной модели измерений. После завершения испытаний и утверждения типа разработанные СО могут использоваться производителями медицинских изделий для диагностики in vitro для приписывания значений калибраторам, а также в клинических лабораториях для контроля правильности результатов измерений при молекулярно-генетической диагностике онкологических заболеваний методом ПЦР в реальном времени.

The given work is devoted to the development of metrological support for measurements of the content of molecular markers HER2, PIK3CA c.1633G>A and EGFR del19 performed during laboratory DNA diagnostics of oncological diseases. Genomic DNA from selected by literature review cell lines was isolated and purified. The optimal amplification conditions were selected by digital PCR, and the concentrations of DNA sequence copies for the selected markers were measured. As a result of the work, the prototypes of reference materials (RM) for the HER2, EGFR and PIK3CA measurements were developed. The prototype of RM for the PIK3CA measurements was tested for stability. An uncertainty budget was prepared for the selected measurement model. After certification, such RM can be used by manufacturers of medical devices for in vitro diagnostics to assign values to calibrators, as well as in clinical laboratories to monitor the accuracy of measurement results in the molecular genetic diagnosis of oncological diseases by real-time PCR.