Детальная информация

Цель работы – подбор методики изготовления жидкого эритроцитарного дифтерийного антигенного диагностикума для выявления антител к дифтерийному анатоксину в реакции пассивной гемагглютинации. Проведён сравнительный анализ трёх методов химической фиксации бараньих эритроцитов. Установлено, что акролеин обеспечивает наилучшее сохранение морфологии клеток и высокую стабильность диагностикума. Определена оптимальная концентрация танина для обработки эритроцитов – 1:40000. Показано, что обработка додецилсульфатом натрия приводит к спонтанной агглютинации. Подобрана необходимая нагрузочная доза дифтерийного анатоксина 30 Lf/мл при pH среды для сенсибилизации – 6,4. Экспериментально подтверждена возможность проведения сенсибилизации в ускоренном режиме при температуре 56°C в течении 30 мин без потери специфической активности. Разработанные диагностикумы специфичны, что подтверждено реакцией торможения пассивной гемагглютинации (РТПГА) и сохраняют стабильность в течение 12 месяцев хранения при температуре 2-8 °C. Расчётный срок годности для серии на основе акролеина составил 17 месяцев. Результаты работы могут быть внедрены в практику биотехнологических производств для выпуска диагностических тест-систем для серологического мониторинга противодифтерийного иммунитета. Для достижения данных результатов в работе были использованы базы данных eLIBRARY, Google академия, Scopus, PubMed, КиберЛенинка. Обработка экспериментальных данных проводилась с применением пакета Microsoft Office.

Objective: To select a method for manufacturing a liquid erythrocyte diphtheria antigenic diagnosticum for detecting antibodies to diphtheria toxoid in the passive hemagglutination assay. A comparative analysis of three methods for chemical fixation of sheep erythrocytes was performed. It was established that acrolein ensures the best preservation of cell morphology and high stability of the diagnosticum. The optimal concentration of tannin for erythrocyte treatment was determined to be 1:40,000. It was shown that treatment with sodium dodecyl sulfate leads to spontaneous agglutination. The optimal loading dose of diphtheria toxoid was selected as 30 Lf/mL at a sensitization pH of 6.4. The possibility of accelerated sensitization at 56°C for 30 minutes without loss of specific activity was experimentally confirmed. The developed diagnosticums were specific, as confirmed by the passive hemagglutination inhibition test, and remained stable for 12 months of storage at 2–8°C. The estimated shelf life for the acrolein-based batch was 17 months. The results of the work can be implemented in biotechnological manufacturing practices for the production of diagnostic test systems for serological monitoring of anti-diphtheria immunity. To achieve these results, the following databases were used: eLIBRARY, Google Scholar, Scopus, PubMed, and CyberLeninka. Experimental data were processed using the Microsoft Office software package.