Детальная информация

Цель работы – сравнить различные методы выделения нуклеиновых кислот из образцов зубного налета человека.  Задачи, которые решались в ходе исследования: 1. Изучение литературных данных по микробиоте ротовой полости. 2. Выделение нуклеиновых кислот из образцов зубного налета методами спиртового осаждения, сорбции на частицах силикагеля, сорбции на магнитных частицах и термического лизиса. 3. Постановка ПЦР в режиме реального времени с праймерами к гену MGL. 4. Анализ полученных данных. Объектами данного исследования выбраны наборы, применяемые для раз-личных методов выделения нуклеиновых кислот производителя ГК «Алкор Био». Предметом исследования является качественная и количественная характеристика нуклеиновых кислот, выделенных разными методами. При написании литературного обзора использовались следующие базы данных: eLIBRARY.RU. Scopus, NCBI.  В ходе исследования была проведена экстракция нуклеиновых кислот из образцов зубного налета следующими методами: спиртовое осаждение, термический лизис, сорбция на частицах силикагеля, сорбция на магнитных частицах. Для анализа результатов экстракции поставлена ПЦР в реальном времени и получены кривые флуоресценции. Статистическую обработку экспериментальных данных осуществляли с использованием пакета программ Microsoft Excel. На основе полученных данных выяснено, что для проведения анализа нуклеиновых кислот из образцов зубного налета наиболее подходящим является набор «Магно-НК-Био».

The purpose of this work is to compare different methods nucleic acid extraction from human plaque samples. The tasks of this study were as follows: 1. Study of literature on the microbiota of the oral cavity. 2. Nucleic acid extraction from plaque samples by ethanol precipitation, adsorp-tion on silica gel particles, adsorption on magnetic particles and thermal lysis. 3. Conduction of real-time PCR using primers for the MGL gene. 4. Analysis of the received data. The objects of this study were kits used for various methods of nucleic acid ex-traction made by Alkor Bio Group. The subject of the study is the qualitative and quantitative characteristics of nucleic acids isolated by different methods. When writing the literature review, the following databases were used: eLI-BRARY.RU, Scopus, NCBI. During the study, nucleic acid was extracted from plaque samples by the following methods: ethanol precipitation, thermal lysis, adsorption on silica gel particles, and adsorption on magnetic particles. To analyze the extraction results, real-time PCR was performed and fluorescence curves were obtained. Statistical processing of experimental data was carried out using the Microsoft Excel software package. Based on the obtained data, it was found that the «Magno-NK-Bio» kit is the most suitable for nucleic acid analysis in dental plaque samples.

• ВВЕДЕНИЕ
• 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
• 1.1. Нормальная и патогенная микрофлора ротовой полости
• 1.2. Микробиота зубного налета и зубной бляшки
• 1.4. Ферментативная активность ротовой полости при нормальных и
• патологических состояниях
• 1.3. Микробиота при патологических процессах в ротовой полости
• 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
• 2.1. Объект и предмет исследования
• 2.2. Материалы и оборудование
• 2.3. Методы исследования
• 2.3.1. Спиртовое осаждение
• 2.3.2. Сорбция на частицах силикагеля
• 2.3.3. Сорбция на магнитных частицах
• 2.3.4. Термический лизис
• 2.3.5. ПЦР в реальном времени
• 2.4. Математическая обработка результатов
• 2.5. Схема проведения эксперимента
• 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
• 3.1. Результаты ПЦР-РВ, снятые с амплификатора LightCycler 96 Roche
• 3.2. Результаты ПЦР-РВ, снятые с амплификатора BioRAD CFX 96
• 4. ОБЕСПЕЧЕНИЕ БЕЗОПАСНОСТИ УСЛОВИЙ ТРУДА
• 4.1. Анализ опасных и вредных производственных факторов
• 4.2. Мероприятия по пожаро- и взрывоопасности
• ЗАКЛЮЧЕНИЕ
• СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
• СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ИСТОЧНИКОВ
• ПРИЛОЖЕНИЕ А
• ПРИЛОЖЕНИЕ Б