Details

В данной работе разработаны основные этапы нового метода селекции молекул ДНК с жестко заданной нуклеотидной последовательностью. Метод позволяет отличить молекулы с требуемой нуклеотидной последовательностью от молекул с точечными однонуклеотидными мутациями, а также позволяет придать молекулам ДНК инновационное свойство - «липкие концы» с произвольной нуклеотидной последовательностью на краях полученных молекул, что необходимо для конструирования крупных молекул ДНК. Метод аналогичен технологиям секвенирования ДНК следующего поколения, таких как Illumina, Ion Torrent и др. Были оптимизированы условия проведения последовательной элонгации с поддержанием высокой специфичности включения дНТФ в элонгируемую цепь ДНК. При последовательной элонгации подавались как одиночные дНТФ, так и их смесь. Результаты нашей экспериментальной работы подтверждают, что разрабатываемый метод позволяет проводить селекцию молекул ДНК с требуемой нуклеотидной последовательностью.