Цель данной работы – изучение взаимодействия наночастиц серебра (НЧС) разного размера с медь-связывающими белками in vivo и in vitro. НЧС широко распространены, и попадают в большом количестве в окружающую среду. Проблема безопасности НЧС для экологии и человека является интересной, так как они могут влиять на метаболизм меди млекопитающих. Внутрибрюшинное введение НЧС мышам в течение недели показало понижение статуса меди в сыворотке крови. Действие НЧС большего диаметра (около 70 нм) было более выражено, чем частиц диаметром около 10 нм. При этом содержание церулоплазмина (ЦП, (ферр-)оксидаза, основной медь-транспортный белок сыворотки крови) и экспрессия его гена не менялись. Ионы серебра из НЧС связываются с одним из медь-связывающих сайтов ЦП in vivo. Гель-фильтрация сывороток крови мышей с дальнейшим измерением концентраций меди и серебра в хроматографических фракциях показали, что практически вся медь содержалась в составе единственного пика элюции, соответствующего ЦП. Серебро элюировалось в два этапа. Один из пиков сответствовал ЦП, другой элюировался раньше. В экспериментах in vitro доказано, что сферические НЧС всех размеров не связываются с ЦП и альбумином. Однако НЧС взаимодействуют с белком, элюирующимся в ходе гель-фильтрации раньше, чем ЦП. Возможно, таким белком является а2-макроглобулин.

The aim of this work is to study the interaction of silver nanoparticles (SNPs) of various sizes with copper-binding proteins both in vivo and in vitro. SNPs are widespread, and are currently released in large quantities into the environment. The problem of safety of SNPs for ecology and humans is an interesting one, since they can affect the copper metabolism of mammals. Intraperitoneal administration of SNPs to mice during the week showed a decrease in serum copper status. The effect of SNPs of a larger diameter (about 70 nm) was more pronounced than of particles with a diameter of about 10 nm. At the same time, the content of ceruloplasmin (CP, (ferr-) oxidase, the main copper-transport protein in the blood serum) and the expression of its gene did not change. These data show that silver ions from nanoparticles bind to one of the copper-binding sites of CP in vivo. Gel filtration of the blood serum of mice with further measurement of the concentration of copper and silver ions in the chromatographic fractions showed that almost all copper was contained in the composition of a single elution peak corresponding to the CP. Silver eluted in two steps. One of the peaks corresponded to the CP, the other eluted earlier. In vitro experiments have shown that spherical SNPs of all sizes are not associated with ceruloplasmin and albumin. However, SNPs interact with protein, eluting during gel filtration earlier than CP. Perhaps this protein is a2-macroglobulin.

• РЕФЕРАТ
• THE ABSTRACT
• Измерение спектров поглощения в ультрафиолетовом и видимом диапазонах (UV/Vis)
• Неденатурирующий гель-электрофорез
• Денатурирующий гель-электрофорез
• Окрашивание кумасси бриллиантовым синим (Coomassie Brilliant Blue)
• Окрашивание орто-дианизидином
• Иммуноблотинг.
• Гель-фильтрация
• Измерение концентрации ионов меди и серебра