Details

Цель настоящей работы - сравнительное исследование роли активных форм кислорода (АФК) в регуляции пролиферации эмбриональных стволовых клеток человека (ЭСК) и их дифференцированных потомков (дифЭСК). Для оценки редокс-статуса ЭСК в сравнении с дифференцированными клетками, путем спонтанной дифференцировки ЭСК с образованием эмбриоидных тел получена культура дифференцированных фибробласто-подобных клеток-потомков. Сопоставление измеренных с помощью флуоресцентного красителя 2',7'-дихлородигидрофлуоресцеин диацетата внутриклеточных уровней АФК в ЭСК и дифЭСК при нормировке на клеточный объем показало, что разница этих уровней определяется разницей в геометрических размерах клеток и, по всей видимости, не является следствием специфического окислительно-восстановительного статуса ЭСК. В работе продемонстрировано, что уровень внутриклеточных АФК осциллирует в соответствии с пролиферативным циклом ЭСК, достигая своего пика на границе S и G2/M фаз. Направленное понижение внутриклеточного уровня АФК в ЭСК и дифЭСК с помощью антиоксидантов Темпол, Ресвератрол и N-ацетил-L-цистеин приводит к торможению пролиферации и блокированию клеток в (G0/)G1-фазе, которое сопровождается снижением уровня циклина А в обоих типах клеток. Кроме того, в культурах ЭСК при блокировании цикла наблюдалось понижение уровня белка-ингибитора убиквитин-лигазы APC - Emi1. Таким образом, в работе показано, что основные редокс-параметры, а также основополагающие принципы участия АФК в регуляции пролиферации являются схожими в культурах ЭСК и их дифференцированных потомков.