Данная работа посвящена исследованиям в области репарации ДНК Способность клеток исправлять повреждения ДНК - основа сохранения целостности и нормального функционирования генома. В настоящее время интерес к ДНК-репарации обусловлен ее связью с канцерогенезом и необходимостью разработки таргетных лекарственных препаратов. Целью данной работы является изучение кинетики репарации радиоционно-индуцированных двунитевых разрывов (ДР) ДНК in vivo в мозге дрозофилы. Используются генетические конструкции, кодирующие слитый с желтым флуоресцентным белком (YFP) белок MU2, для которого показана ко-локализация с сигнализирующим о прохождении репарации модифицированным гистоном γH2Av после облучения. Визуализация кинетики репарации в реальном времени in vivo у Dr. melanogaster производится методами конфокальной микроскопии. Впервые в мире разработана методика для анализа кинетики репарации радиационно-индуцированных повреждений в реальном времени в живой ткани сложного многоклеточного организма – Drosophila melanogaster. Проанализирована кинетика репарации ДР ДНК в сохраняющем свою жизнеспособность мозге поздней личинки дрозофилы. Среднее время исчезновения сигнала MU2–YFP составило 90 минут для одного разрыва. Обнаружены различия в появлении сигналов, характеризующих репаративное событие, в митотически активных стволовых клетках - вторичных нейробластах и дифференцированных клетках. Обнаружено, что время репарации зависит от количества сайтов, в которых происходит репарация двойного разрыва в данном ядре. При этом и появление, и исчезновение нескольких сигналов, показывающих осуществление процессов репарации ДР ДНК происходит одновременно во всех сайтах ядра. Синтезированы линии дрозофилы, необходимые для анализа роли хроматинремоделирующего фактора Tou в репарации ДР ДНК по разработанной методике.

The ability of cells to repair DNA damage is the basis for maintaining of the genome integrity and functions. Recently an interest to DNA repair is greatly increased due to its role in cancerogenesis and the need to develop targeted drugs. This work is devoted to the studies of DNA repair. The aim of this work is to study the kinetics of the radiation-induced double-stranded DNA breaks (DSB) repair in vivo in Drosophila brain. The genetic constructs encoding the MU2 pro-tein fused with YFP were used. Drosophila MU2 protein recognizes the γH2Av, a histone mark of DSB repair process. MU2 protein is an ortholog of human's MDC1, which interacts with a variant histone H2Ax, phosphorylated by Ser13 (γH2Ax). In vivo repair process of DSB is visualized in real-time by confocal mi-croscopy. Using of fluorescent proteins makes it possible to study the individual components in living tissues. For the first time a technique has been developed to analyze the kinetics of radiation-induced breaks repair in real time in the living tissue of a complex multi-cellular organism - Drosophila melanogaster. The kinetics of DSB DNA repair in the isolated viable brain of the Drosophila late larva was analyzed. The average time of MU2-YFP signal disappearance is 90 minutes for one gap. We observed the differences in appearance of the signals of the reparative event in mitotic active stem cells - secondary neuroblasts and in differentiated cells. We have found that the time required for DSB repair depends on the number of DSB sites per cell. Analysis of the appearance and disappearance of several signals shows that DSB DNA repair processes occurs simultaneously in all sites of the nucleus. Drosophila lines, required for the analysis of the role of chromatin remodeling factor Tou in DNA repair have been synthesized.