Details

Title: Выявление δ-субъединицы ENaC в составе функционально-активного натриевого канала в клетках миелоидной лейкемии человека К562: выпускная квалификационная работа бакалавра: направление 03.03.02 «Физика» ; образовательная программа 03.03.02_02 «Биохимическая физика»
Creators: Лысикова Дарья Владимировна
Scientific adviser: Скворцов Алексей Николаевич; Сударикова Анастасия Владимировна
Other creators: Каасик Владимир Паулович
Organization: Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого. Институт физики, нанотехнологий и телекоммуникаций
Imprint: Санкт-Петербург, 2020
Collection: Выпускные квалификационные работы; Общая коллекция
Subjects: потенциал-независимые натриевые каналы; актин-управляемые каналы; эпителиальные натриевые каналы ENaC; δ-субъединица ENaC; капсазепин; клетки лейкемии человека; patch-clamp; voltage-independent sodium channels; epithelial sodium channels ENaC; actin-gated channels; δ-ENaC subunit; capsazepine; human leukemia cells
Document type: Bachelor graduation qualification work
File type: PDF
Language: Russian
Level of education: Bachelor
Speciality code (FGOS): 03.03.02
Speciality group (FGOS): 030000 - Физика и астрономия
Links: Отзыв руководителя; Отчет о проверке на объем и корректность внешних заимствований
DOI: 10.18720/SPBPU/3/2020/vr/vr20-3616
Rights: Доступ по паролю из сети Интернет (чтение, печать, копирование)
Record key: ru\spstu\vkr\7880

Allowed Actions:

Action 'Read' will be available if you login or access site from another network Action 'Download' will be available if you login or access site from another network

Group: Anonymous

Network: Internet

Annotation

Данная работа посвящена изучению потенциал-независимых актин-управляемых натриевых каналов в клетках лейкемии человека К562. По своим характеристикам и механизмам регуляции исследуемые каналы близки к семейству ENaC, за исключением чувствительности к ингибитору амилориду. Остается открытым вопрос об их возможном субъединичном составе. Целью работы являлось изучение возможного участия δ-субъединицы ENaC в составе функционально-активного натриевого канала в клетках К562. В конфигурации whole-cell метода патч-кламп зарегистрировали активность одиночных каналов, активируемых при разборке цитоскелета Цитохалазином Д (100% опытов), изучили их характеристики в Na+ или Li+ содержащем внеклеточном растворе. Проводимость части регистрируемых каналов для Li+ была снижена по сравнению с Na+ (145 мМ). Эта особенность является основным биофизическим признаком ENaC, содержащих δ субъединицу (вместо α). Результаты иммунофлуоресцентного окрашивания подтвердили экспрессию δ-hENaC (наряду с α-, β-, γ-ENaC). В опытах whole-cell обнаружено, что внеклеточное добавление капсазепина, активатора δ-ENaC, вызывало активацию натриевых каналов в 67% опытов. Биофизические характеристики каналов, активированных капсазепином, совпадали с характеристиками актин-управляемых каналов. При замене Na+ в камере на Li+ наблюдали уменьшение амплитуды токов и проводимости каналов. На основании полученных результатов можно предположить, что функционально-активные каналы ENaC в клетках К562 содержат δ субъединицу. Дальнейшее изучение состава и механизмов регуляции ENaC в трансформированных клетках крови актуально для разработки новых таргетных терапевтических стратегий воздействия на раковые клетки.

The given work is devoted to voltage-independent sodium channels in human leukemia cells. According to their characteristics and regulatory mechanisms they are close to the ENaC family, but not sensitive to inhibitor amiloride. The question remains about their possible subunit composition. The aim of the work was to study the possible participation of the δ-ENaC subunit in the composition of functionally active sodium channels in K562 cells. Using whole-cell patch-clamp method and Cytochalasine D for cytoskeleton disassembly, we recorded the activity of single actin-gated channels (in 100% of experiments), their characteristics were studied in extracellular solution containing Na+ or Li+. The single-channel conductance of some channels for Li+ was reduced in comparison to Na+ (145 mM). This characteristic is the main biophysical feature of ENaC that contains δ-subunit (instead of α). Using immunofluorescence staining of K562 cells with specific antibodies, the presence of the δ-subunit of ENaC was confirmed (along with α-, β-, γ-ENaC). In whole-cell experiments it was found that the extracellular addition of capsazepine, an activator of δ ENaC, caused the activation of sodium channels in 67% experiments. The electrophysiological characteristics of the capsazepine- activated channels coincided with the characteristics of actin-gated channels. The replacement of solution in the chamber with Li+-containing one resulted in decrease of current amplitude and channel conductance. Based on this fact, it can be assumed that ENaC channels in K562 cells contain δ subunit. Further study of the composition and mechanisms of regulation of ENaC in transformed blood cells is relevant for the development of new targeted therapeutic strategies for cancer treatment.

Document access rights

Network User group Action
ILC SPbPU Local Network All Read Print Download
External organizations N2 All Read
External organizations N1 All
Internet Authorized users SPbPU Read Print Download
Internet Authorized users (not from SPbPU, N2) Read
Internet Authorized users (not from SPbPU, N1)
-> Internet Anonymous

Usage statistics

stat Access count: 15
Last 30 days: 1
Detailed usage statistics