Details

В данной работе оценено влияние различных параметров запаковки генетического материала в полимерные наноносители и условий их совместной инкубации с клетками млекопитающих на эффективность трансфекции. Для достижения цели исследования были разработаны протоколы запаковки плазмидной ДНК в частицы карбоната кальция, окруженные полимерной оболочкой. Было изучено влияние органических добавок (PARG, пептидный ингибитор ДНКазы IISLRLLQWFLWAC)на уровень трансфекции клеток млекопитающих. Были подобраны оптимальные условия сокультивирования клеток млекопитающих и полимерных наночастиц, содержащих генетический материал. Результатом проделанной работы является отработанная методика доставки генетического материала для трансфекции клеток млекопитающих, что является основой для последующих этапов развития проекта.

In this work, the influence of different parameters of packing of genetic material and conditions of incubation of mammalian cells on the efficiency of transfection was evaluated. To achieve the goal of the research, protocols for packing plasmid DNA into calcium carbonate particles surrounded by a polymer shell were developed. The effect of organic additives (PARG, peptide inhibitor DNase II SLRLLQWFLWAC) on the level of mammalian cell transfectionwas studied.The optimal conditions for incuba-tion of mammalian cells and polymer nanoparticles containing genetic material were selected. The result of this work is a proven method for the delivery of genetic material, applicable for transfection of mammalian cells, which is the basis for the subsequent stages of the project's development.

• СПИСОК АББРЕВИАТУР
• ВВЕДЕНИЕ
• ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
• 1.1 Генная терапия
• 1.2 Вирусные системы доставки
• 1.2.1 Рекомбинантные аденоассоциированные вирусы
• 1.2.2 Лентивирусы
• 1.2.3 Аденовирусы
• 1.3 Невирусные системы доставки
• 1.4 Полимерные наноносители
• 1.5 Внутриклеточные процессы при захвате полимерных наноносителей
• ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
• 2.1 Материалы
• 2.2 Синтез полимерных наноносителей
• 2.2.1 Синтез ядер CaCO3
• 2.2.2 Нанесение полиэлектролитных слоев
• 2.3 Определение количества генетического материала
• 2.4 Методы
• 2.4.1 Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия
• 2.4.2 Сканирующая электронная микроскопия
• 2.4.3 Электрофорез в агарозном геле
• 2.4.4 Проточная цитометрия
• ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
• 3.1 Характеризация полимерных наноносителей
• 3.2 Экспериментальная часть
• ВЫВОДЫ
• СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ