Квалификационная работа магистра посвящена исследованию изменений биологических свойств вакцинного штамма для живой аттенуированной гриппозной вакцины A/17/Техас/12/30 (H3N2) при его адаптации к культуре клеток MDCK. В процессе работы был проведен глубокий анализ современной литературы по состоянию проблематики производства ЖГВ, и было определено, что альтернативным решением существующих проблем является переход производства ЖГВ с использованием куриных эмбрионов в качестве субстрата накопления вируса на клеточные культуры. Однако, вопрос о влиянии адаптационных мутаций на биологические свойства вакцинных штаммов ЖГВ требовал дополнительных исследований. Для этого были получены MDCK-адаптированные штаммы Тех 17 и исследовано влияние аминокислотных замен в молекуле гемагглютинина на репродукцию, инфекционные титры и термостабильность вируса A/17/Техас/12/30 (H3N2). В результате проведенных экспериментов было выявлено, что  аминокислотные замены: V176I, P215T, P221S, D265E в HA1 и W92G, N154K, D160H в HA2 повышают ростовые характеристики и инфекционные титры виурса A/17/Техас/12/30 (H3N2) в клеточной культуре MDCK, в то время как аминокислотная замена Y85E понижает репродукцию вируса в культуре клеток MDCK. Аминокислотные замены: P215T в HA1 и Y83H в HA2 повышают термостабильность вируса A/17/Техас/12/30 (H3N2) в клеточной культуре MDCK, в то время как аминокислотная замена K124E в HA1 снижает термостабильность вируса в культуре клеток MDCK.

The master's qualification work is devoited to the study of changes in the biological properties of vaccine strains of the LAIV virus A/17/Texas/12/30 H3N2 during its adaptation to MDCK cell culture. In the course of the work, a deep analysis of the current literature on the state of the problem of LAIV production was carried out, and it was determined that an alternative solution to existing problems is the transition of LAIV production using chiken embriose as a substrate for virus accumulation in cell cultures. However, the issue of the effect of adaptive mutations on the biological properties of LAIV vaccine strains requared additional research. For this, MDCK-adapted strains of the Tex17 were obtained and the effect of the amino acid substitutions inthe hemagglutinin molecule on reproduction, infectious titers and thermal stability of the A/17/Texas/12/30 H3N2 virus was studied. As a result of the experiments, it was found that amino acid substitutions: V176I, P215T, P221S, D265E in HA1 and W92G, N154K, D160H in HA2 increase the growth characteristics and infectious titers of the A/17/Texas/12/30 H3N2 virus in the cell culture, while the Y85E amino acid substitution reduces virus reproduction in MDCK cell culture. Amino acid substitutions: P215T in HA1 and Y83H in HA2 increase thermal stability of the A/17/Texas/12/30 H3N2 virus in MDCK cell culture, while amino acid substitution K124E in HA2 reduces thermal stability of the virus in MDCK cell culture.

• 458fa0ee22516c15a338d11a7c1e23827451d1088a9f179e6297114a86163e64.pdf
• САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПОЛИТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ
• 458fa0ee22516c15a338d11a7c1e23827451d1088a9f179e6297114a86163e64.pdf
• fa84994f0b20951b0f409e3a703f7250e453968647f7c1fb84a43f6902c2332f.pdf
  • 1.1.2. Строение вируса гриппа
  • 1.2. Виды гриппозных вакцин
  • 1.3. Производство живых гриппозных вакцин
  • 2.2. Методы
    • 2.2.1. Ведение клеточной линии MDCK
    • 2.2.5. Подготовка вирусных стоков в куриных эмбрионах
    • 2.2.6. Заражение клеточной культуры MDCK
  • ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ
    • 3.1. Определение культурально-адаптационных мутаций в белке гемагглютинина после адаптации вируса A/17/Техас/12/30 (H3N2) к культуре клеток MDCK
    • 3.2. Влияние адаптационных мутаций на ростовые характеристики вируса A/17/Техас/12/30 H3N2
    • 3.3. Результаты секвенирования генов HA клонов вируса A/17/Техас/12/30 H3N2 после накопления вирусов в куриных эмбрионах и клетках MDCK
    • 3.4. Результаты исследования влияния адаптационных мутаций на термостабильность вируса A/17/Техас/12/30 H3N2
    • 3.5. Обсуждение результатов
      • 3.5.1. Влияние термостабильности на эволюцию вируса гриппа
      • 3.5.2. Строение молекулы гемагглютинина