Details

Тема выпускной квалификационной работы: «Зависимость эффективности системы рестрикции-модификации II типа Esp1396I от количества регуляторного белка C.Esp1396I в клетке».Системы рестрикции-модификации – это защитные системы бактерий и архей, осуществляющие защиту клеток от инвазивной ДНК. В составе систем рестрикции-модификации защита осуществляется за счёт ферментов, обладающие двумя видами каталитической активности: эндонуклеазная активность, благодаря которой происходит расщепление чужеродной ДНК в сайтах рестрикции, и метилтрансферазная активность, обеспечение которой приводит к защите ДНК-клетки хозяина от расщепления в данных сайтах. Эффективность защиты зависит от временной динамики экспрессии белков системы рестрикции-модификации, поэтому важна регуляция их работы.Данная работа посвящена оценке зависимости эффективности системы рестрикции-модификации II типа Esp1396I от количества регуляторного белка C.Esp1396I в клетке. С помощью методов анализа уровня флуоресценции (на уровне клеточных культур и на уровне отдельных клеток) и оптической плотности клеточных культур было показано, что увеличение количества гибридного регуляторного белка C.Esp1396I, слитого с флуоресцентным белком mNeonGreen, приводит к нарушению баланса белков системы рестрикции-модификации Esp1396I, что порождает значительное изменение эффективности защиты бактерий от вируса.

The subject of the graduate qualification work is “Dependence of Esp1396I restriction-modification II type system protection efficiency on amount of regulatory protein C.Esp1396I”.Restriction-modification systems are protective systems of bacteria and archaea that prevent invasive DNA spreading in cells. As part of restriction-modification systems, protection is carried out by enzymes having two types of catalytic activity: endonuclease activity, due to which foreign DNA is cleaved at restriction sites, and methyltransferase activity, the effort of which leads to the protection of the host DNA cell from cleavage at these sites. The effectiveness of protection depends on the temporal dynamics of the restriction-modification system proteins expression; therefore, regulation of their work is too important.This work is devoted to the evaluation of the dependence of the efficiency of the restriction-modification system type II Esp1396I on the amount of regulatory protein C.Esp1396I in cells. Using methods of analysis of the level of fluorescence (at the level of cell cultures and at the level of individual cells) and the optical density of cell cultures, it was shown that an increase in the amount of hybrid regulatory protein C.Esp1396I fused with the fluorescent protein mNeonGreen leads to a violation of the restriction-modification system protein balance, which generates a significant change in the effectiveness of protecting bacteria from the bacteriophage.