Работа посвящена получению ферментативной системы восстановления АТФ на основе пируваткиназы и аденилаткиназы Escherichia coli. В работе были сконструированы плазмиды, содержащие гены аденилаткиназы и пируваткиназы E. coli, наработаны и выделены соответствующие белки. Была проведена качественная проверка ферментативной активности выделенных аденилаткиназы и пируваткиназы и количественная проверка ферментативной активности аденилаткиназы. Для проверки эффективности ферментативной системы восстановления АТФ было использовано добавление этой системы к реакции рекомбиназной полимеразной амплификации (РПА), при протекании которой потребляется АТФ. Качественная проверка ферментативной активности пируваткиназы позволила сделать вывод, что пируваткиназа проявляет сильную ферментативную активность. Качественная и количественная проверки ферментативной активности аденилаткиназы позволила сделать вывод, что аденилаткиназа проявляет более слабую, но определяемую ферментативную активность. Сравнение эффективности амплификации в реакции РПА без ферментативной системы восстановления АТФ и с ней, проведённое с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени, позволило сделать вывод, что ферментативная система восстановления АТФ повышает эффективность РПА.

The given work is devoted to making enzymatic system of ATP regeneration based on adenylate kinase and pyruvate kinase of Escherichia coli. In the work plasmids, containing genes of adenylate kinase and pyruvate kinase of E. coli, were constructed, the corresponding proteins were accumulated and purified. Quality verification of enzymatic activity of purified adenylate kinase and pyruvate kinase and quantity verification of enzymatic activity of purified adenylate kinase were conducted. Addition of enzymatic system of ATP regeneration to recombinase polymerase amplification (RPA) which consumes ATP while it is happening was used to verify the efficiency of the system. Quality verification of enzymatic activity of pyruvate kinase allowed to make a conclusion that pyruvate kinase has strong enzymatic activity. Quality and quantity verification of enzymatic activity of adenylate kinase allowed to make a conclusion that adenylate kinase has comparatively weak enzymatic activity. Comparison of amplification efficiency in RPA reaction with addition of enzymatic system of ATP regeneration and without the system which was undertaken through real-time polymerase chain reaction allowed to make a conclusion that enzymatic system of ATP regeneration increases the efficiency of RPA.