Details

Целью данной работы являлось разработка метода ПЦР с обратной транскрипцией в одной пробирке для количественного анализа молекул микроРНК при визуализации фолликулярной аденомы и фолликулярной карциномы щитовидной железы. Задачи, которые решались в ходе исследования: 1. Изучение источников о роли молекул микроРНК в диагностике опухолевых заболеваний. 2. Отбор необходимого количества клинических образцов щитовидной железы (фолликулярной аденомы и фолликулярной карциномы). 3. Разработка и оптимизация протокола для проведения ПЦР с обратной транскрипцией в одной пробирке. 4. Сравнение показателей чувствительности и специфичности анализа выбранных молекул в клинических образцах методами ОТ-ПЦР. Работа была выполнена в лаборатории субклеточных технологий с группой онкоэндокринологии НМИЦ онкологии им. Н. Н. Петрова. Проведена экспериментальная разработка системы ОТ-ПЦР с обратной транскрипцией в одной пробирке синтетическими аналогами микроРНК miR-146a и miR-185. Материалы и методы: 12 образцов микроРНК, выденной из FFPE фоликулярной аденомы и 12 FFPE фоликулярной карциномы для оценки диагностической значимости. Анализ уровня экспрессии 24 обрацзов микроРНК был проведен методом ОТ-ПЦР со стандартным протоколом и протоколом для ОТ-ПЦР в одной пробирке. Результаты: Экспрессия miR-146a и miR-185 в разработанной системы ОТ-ПЦР в одной пробирке оказалась практически одинаковым со сравнением процедуры стандартного протокола ОТ-ПЦР. Выводы: Дальнейшие использования метода ОТ-ПЦР в одной пробирке с целью исследования микроРНК в заболеваниях ЩЖ для разработки новых подходов к диагностике этих заболевания. При написании литературного обзора использовались такие базы данных, как NIH, Spandidos publications, Journal of molecular endocrinology.

The aim of this work was to develop a single-tube reverse transcription PCR method for quantitative analysis of microRNA molecules in imaging follicular adenoma and follicular thyroid carcinoma. Tasks that were solved during the research: 1. Study of sources on the role of microRNA molecules in the diagnosis of tumor diseases. 2. Selection of the required number of clinical samples of the thyroid gland (follicular adenoma and follicular carcinoma). 3. Development and optimization of a protocol for conducting PCR with reverse transcription in a single tube. 4. Comparison of sensitivity and specificity of the analysis of selected molecules in clinical samples by RT-PCR methods The work was performed in the laboratory of subcellular Technologies with the Oncoendocrinology group of the N.N. Petrov National Research Institute of Oncology. An experimental development of a RT-PCR system with reverse transcription in one tube with synthetic miR-146a and miR-185 microRNA analogues has been carried out. Materials and methods: 12 samples of microRNA extracted from FFPE follicular adenoma and 12 FFPE follicular carcinoma for diagnostic significance. The expression’s level of 24 microRNA samples was analyzed by RT-PCR with a standard protocol and a protocol for one step RT-PCR in one test tube. Results: The expression of miR-146a and miR-185 in the developed RT-PCR system in one test tube turned out to be almost identical in comparison of the procedure of the standard RT-PCR protocol. Conclusions: Further use of the single-tube RT-PCR method for the study of microRNAs in the thyroid gland’s cancer to develop new approaches to the diagnosis of these diseases. Databases such as NIH, Spandidos publications, and Journal of Molecular endocrinology were used when writing the literary review.