Details

Данная работа посвящена характеризации моноклональных (мАТ) и рекомбинантных (контрольных) антител (кАТ) к рецепторам VEGFR-1, CTLA-4 и Stabilin-1, представленным на клетках опухолевой стромы и получению клеточной линии, продуцирующей биспецифическое антитело (биАТ). Аффинность антител проверяли методом ИФА, способность связываться с нативным антигеном с помощью проточной цитометрии. Пролиферативную активность клеток в присутствии антител оценивали на системе xCellLigence. В результате было показано, что все исследуемые мАТ и кАТ к рецептору VEGFR-1 обладают высокой аффинностью к соответствующему рекомбинантному человеческому белку. На панели клеточных линий человека продемонстрировано связывание с различной эффективностью мАТ с нативными антигенами VEGFR-1 и СTLA-4 и связывание мАТ с нативным антигеном Stabilin-1 на поверхности макрофагов человека. Для кАТ не было выявлено связывания с соответствующими антигенами ни в одной из исследованных клеточных линий. Исследуемое мАТ против рецептора VEGFR-1 оказывает антипролиферативное воздействие на ряд опухолевых клеточных линий, но на клетки нормальной морфологии оно не оказывает выраженного цитотоксического эффекта. Характеризуемые мАТ против СTLA-4 или Stabilin-1, а также кАТ против всех трех рецепторов не продемонстрировали значимого ингибирования роста опухолевых клеток человека. Также получена клеточная линия человека НЕК-293Т, стабильно экспрессирующая биАТ, несущее домены связывания рецепторов VEGFR-1 и Stabilin-1.

The given work is devoted to the characterisation of monoclonal (mAbs) and recombinant (control) antibodies (cAbs) to VEGFR-1, CTLA-4 and Stabilin-1 receptors presented on tumour stroma cells and to obtaining a cell line producing a bispecific antibody (bispAb). The affinity of the antibodies was tested by ELISA, and the ability to bind to native antigen by flow cytometry. The proliferative activity of cells in the presence of antibodies was evaluated on the xCellLigence system. As a result, it was shown that all tested mAbs and cAbs to VEGFR-1 receptor have high affinity to the corresponding recombinant human protein. A panel of human cell lines demonstrated binding of mAbs to native VEGFR-1 and CTLA-4 antigens and binding of mAbs to native Stabilin-1 antigen on the surface of human macrophages with varying efficiencies. For cAbs, no binding to the respective antigens was detected in any of the cell lines studied. The studied mAbs against the VEGFR-1 receptor has an antiproliferative effect on a number of tumour cell lines, but it has no pronounced cytotoxic effect on cells of normal morphology. Characterized mAbs against CTLA-4 or Stabilin-1, as well as cAbs against all three receptors, did not demonstrate significant growth inhibition of human tumour cells. A human cell line HEK-293T stably expressing bispAb carrying the binding domains of VEGFR-1 and Stabilin-1 receptors was also obtained.