Details

Кальпаины – это семейство внутриклеточных протеолитических ферментов, которые, расщепляя свои субстраты, вовлекаются в регуляцию всех физиологических функций. В последнее десятилетие активность кальпаинов в крови человека рассматривается в качестве диагностического или прогностического маркера развития ряда заболеваний нервной системы, поэтому необходимо разработать простой и дешевый метод определения активности кальпаинов. Однако необходимо учитывать, что наиболее информативными являются методы, позволяющие определять активность различных изоформ кальпаинов. Поэтому целью исследования стало: обосновать возможность применения метода казеиновой зимографии в геле с использованием бета-казеина коровы для анализа активности кальпаинов человека и крысы. При выполнении данной работы нами было показано, что в аминокислотной последовательности бета-казеина коровы, крысы и человека имеется, как минимум, семь совпадающих потенциальных сайтов расщепления кальпаинами. При расщеплении по данным сайтам образуются белковые фрагменты длиной не более 60 аминокислот; продукты протеолиза вымываются из ПААГ при проведении казеиновой зимографии в геле по общепринятому протоколу. На основании полученных нами данных можно заключить, что для анализа активности кальпаинов человека и крысы методом казеиновой зимографии в геле может использоваться казеин, выделенный из молока коровы.

Calpains are a family of intracellular proteolytic enzymes that, by cleaving their substrates, are involved in the regulation of all physiological functions. In the last decade, the activity of calpains in human blood has been considered as a diagnostic or prognostic marker for the development of a number of diseases of the nervous system, so it is necessary to develop a simple and cheap method for the determination of calpain activity. However, it is necessary to take into account that the most informative are methods that allow to determine the activity of different calpain isoforms. Therefore, the aim of the study was: to substantiate the possibility of applying the method of casein zymography in gel using cow beta-casein to analyze the activity of human and rat calpains. In this work we have shown that there are at least seven overlapping potential calpain cleavage sites in the amino acid sequence of bovine, rat and human beta-casein. The cleavage of these sites produces protein fragments not more than 60 amino acids in length; the proteolysis products are washed out of PAGE during casein zymography in gel according to the generally accepted protocol. Based on our data, we can conclude that casein isolated from cows milk can be used to analyze the activity of human and rat calpains by casein zymography in gel.