Details

Данная работа посвящена исследованию затухания поляризованной флуоресценции NADPH в свободной форме и связанного с ферментами IDH и ADH. В настоящее время распространенным методом исследования процессов релаксации, протекающих в возбужденных биомолекулах, является время-разрешенная флуоресцентная спектроскопия. Благодаря спектральным особенностям NADPH используется для неинвазивной диагностики метаболизма клеток как флуоресцентный внутриклеточный маркер. Целью работы являлось исследование и анализ механизмов релаксации возбужденного состояния кофермента NADPH в растворе в свободной форме и в связанной с ферментами с помощью метода поляризационной время-разрешенной флуоресцентной спектроскопии. Задачи исследования: провести измерения сигналов затухания флуоресценции NADPH в свободной и связанной форме, обработать сигналы, определить параметры флуоресценции и провести сравнительный анализ. Двухфотонное возбуждение молекул осуществлялось фемтосекундными лазерными импульсами с длиной волны 730-840 нм. Регистрация поляризационных компонент осуществлялась с помощью призмы Глана и лавинного фотодетектора. В настоящей работе был проведен анализ параметров затухания поляризованной флуоресценции NADPH в свободном состоянии и в связанном с ферментами алкоголь-дегидрогеназой (ADH) и изоцитрат-дегидрогеназой (IDH). Полученный результат может быть использован для разделения NADPH с другими ферментами в растворах и живых клетках.

The given work is devoted to the research of polarized fluorescence decay of NADPH in free form and bound with the enzymes IDH and ADH. Currently, a common method for researching relaxation processes occurring in excited biomolecules is fluorescence lifetime spectroscopy. Due to its spectral properties, NADPH is used for non-invasive diagnosis of pendulum cells as a fluorescent intracellular marker. The purpose of the work was to study and analyze the relaxation parameters of the excited state of the coenzyme NADPH in free form and bound to enzymes using methodological polarization fluorescence lifetime spectroscopy. Research problems: to measure fluorescence decay signals of NADPH in free and bound forms, process the signals, determine fluorescence parameters, analyze and compare the results. Two-photon excitation of molecules was carried out by femtosecond laser pulses in the wavelength range 730-840 nm. Polarization components were detected using a Glan prism and an APD. In this work, we analyzed parameters of polarized fluorescence decay of NADPH in the free form and bound with the enzymes alcohol dehydrogenase (ADH) and isocitrate dehydrogenase (IDH). The result obtained can be used to separate NADPH by other coenzymes in solutions and living cells.