Details

Работа посвящена сравнению эффективности синтеза NAD по амидированному и деамидированному путям в мЭСК в плюрипотентном состоянии и после дифференцировки. Было выяснено, что NAD+ -зависимые метаболические и регуляторные процессы являются важными факторами в поддержании плюрипотентности и дифференцировке эмбриональных стволовых клеток млекопитающих. Эффективность NAD-зависимых процессов зависит от уровня внутриклеточного NAD. В последние годы было показано, что нарушение деамидированного пути синтеза NAD приводит к нарушениям эмбриогенеза и множественным порокам развития. В данной работе мы использовали такие методы, как окрашивание на щелочную фосфатазу, NAD+/NADH Cycling Assay, МТТ-тест. Было показано, что в плюрипотентном состоянии NAD синтезируется эффективнее из NR, чем из NAR. Также в процессе дифференцировки эффективность синтеза NAD по деамидированному пути возрастает. Кроме того, метаболическая активность клеток E14 в плюрипотентном состоянии не отличается в присутствии NR или NAR в качестве предшественников синтеза NAD. Таким образом, эффективность синтеза NAD по деамидированному и амидированному путям отличается в плюрипотентном и дифференцированном состояниях.

The work is devoted to comparing the efficiency of NAD synthesis along the amidated and deamidated pathways in mESCs in the pluripotent state and after differentiation. It was found that NAD+-dependent metabolic and regulatory processes are important factors in maintaining pluripotency and differentiation of mammalian embryonic stem cells. The effectiveness of NAD-dependent processes depends on the level of intracellular NAD. In recent years, it has been shown that disruption of the deamidated NAD synthesis pathway leads to impaired embryogenesis and multiple malformations. In this work, we used methods such as alkaline phosphatase staining, NAD+/NADH Cycling Assay, and MTT test. It has been shown that in the pluripotent state, NAD is synthesized more efficiently from NR than from NAR. Also, during differentiation, the efficiency of NAD synthesis along the deamidated pathway increases. In addition, the metabolic activity of E14 cells in the pluripotent state does not differ in the presence of NR or NAR as precursors of NAD synthesis. Thus, the efficiency of NAD synthesis along the deamidated and amidated pathways differs in the pluripotent and differentiated states.