Details

Данная работа посвящена выделению белков MukE и MukF комплекса MukBEF. Комплекс MukBEF был обнаружен в клетках Escherichia coli и является гомологом комплекса SMC, найденного в клетках всех живых организмов. Комплекс MukBEF Escherichia coli ответственен за процессы клеточного деления, причём каждый из его структурных белков — MukE, MukF и MukB — несёт свою функцию. Выделение этих белков даст возможность приблизиться к лучшему пониманию механизмов работы всего комплекса и его гомологов. Гены mukE и mukF, ответственные за экспрессию белков, были амплифицированы и лигированы с плазмидной ДНК. Компетентные клетки были трансформированы полученной плазмидой. Колонии, содержащие вставку, были культивированы, а затем из них была выделена плазмида для дальнейшей трансформации экспрессионного штамма. Экспрессия была индуцирована добавлением в чашку с культурой ИПТГ. Для выделения и очистки белков использовалась аффинная хроматография. В результате мы получили очищенные белки MukF и MukE со средней концентрацией 0.5 и 4 мг/мл соответственно, готовые для дальнейшего изучения и работы.

The given work is devoted to the isolation of MukE and MukF proteins of the MukBEF complex. The MukBEF complex was found in Escherichia coli cells and is a homologue of the SMC complex found in cells of all living organisms. The MukBEF complex of Escherichia coli is responsible for cell division processes, and each of its structural proteins - MukE, MukF and MukB - has its own function. The isolation of these proteins will give an opportunity to get closer to a better understanding of the mechanisms of the whole complex and its homologues. The mukE and mukF genes responsible for protein expression were amplified and ligated to plasmid DNA. Competent cells were transformed with the resulting plasmid. Colonies containing the insert were cultured, and then the plasmid was isolated from them for further transformation of the expression strain. Expression was induced by adding IPTG to the culture dish. Affinity chromatography was used for protein isolation and purification. As a result, we obtained purified MukF and MukE proteins with an average concentration of 0.5 and 4 mg/ml, respectively, ready for further study and work.