Details

Объектом исследования в данной работе является белок Lzp (Leucine zipper protein) Streptococcus pyogenes, потенциально способный связываться с Fc-фрагментом иммуноглобулинов классов A, G, M человека, что препятствует формированию гуморального иммунного ответа. Белок Lzp располагается на поверхности стрептококка, пронизывая мембрану и клеточную стенку, в связи с чем его экстракция в нативном виде является затруднительной, поэтому требовалось создать штамм-продуцент для гетерологичной экспрессии гена lzp. С использованием методов создания рекомбинантного вектора, экспрессирующего ген lzp в клетках E. coli и очистки полученного пептида с помощью металлохелатной хроматографии, было получено достаточное количество пептида для проведения иммунологических тестов, направленных на подтверждение связывания Fc-фрагментов иммуноглобулинов. При помощи методов биоинформатического анализа удалось установить распространенность гомологов гена lzp среди различных видов стрептококков. Сравнительный анализ аминокислотной последовательности показал, что последовательность белка Lzp является вариабельной в области предполагаемого взаимодействия с иммуноглобулинами и консервативной в местах закрепления на поверхности стрептококка. Построенная модель Lzp внешне схожа с M и M-подобными белками стрептококков.

The object of research in this work was the Leucine zipper protein (Lzp) of Streptococcus pyogenes, which is potentially capable to bind the Fc-fragment of human immunoglobulins of classes A, G, and M, which prevents the formation of a humoral immune response. The Lzp protein is located on the surface of the streptococcus, penetrating the membrane and cell wall, therefore its extraction in its native form is hampered, that is why it was necessary to create a producer strain for heterologous expression of the lzp gene. By use the methods of creating a recombinant vector expressing the lzp gene in E. coli cells and purifying the resulting peptide via metal-chelate chromatography, a sufficient amount of peptide was obtained to conduct immunological tests aimed at confirming the binding of Fc-fragments of immunoglobulins. By applying bioinformatics analysis methods, it was possible to establish the prevalence of lzp gene homologues among various streptococcal species. Comparative analysis of the amino acid sequence shew that the Lzp protein sequence was variable in the area of the supposed interaction with immunoglobulins and conservative in the sites of attachment to the streptococcal surface. The constructed model of Lzp protein was externally similar to M- and M-like proteins of streptococci.